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Article de méthode

La technique de spectroscopie de dichroïsme circulaire pour étudier les interactions ADN-protéines

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Arya, V., et al. Spectroscopie CD pour étudier les interactions ADN-Protéine. J. Vis. Exp. (2022).

Cette vidéo démontre la technique de spectroscopie de dichroïsme circulaire (CD) pour étudier les changements conformationnels se produisant dans l’ADN en présence d’une protéine de remodelage de la chromatine dépendante de l’ATP. Les changements dans les spectres CD mesurés en présence et en absence d’hydrolyse de l’ATP indiquent l’importance de l’ATP dans la capacité du remodeleur à induire des changements conformationnels dans l’ADN lié.

Protocole

1. Concentration de travail des composants de la réaction

  1. Préparez fraîchement les concentrations de travail des tampons pour la CD et maintenez-les à 4 °C avant de mettre en place les réactions.
    note: Pour les réactions CD décrites dans cet article, les concentrations de travail des composants sont les suivantes : Tampon phosphate de sodium (pH 7,0) 1 mM, ATP 2 mM, ADN 500 nM, Protéine 1 μM, MgCl2 10 mM, EDTA 50 mM, ADAADiN 5 μM.

2. Choix et préparation des cuvettes CD

  1. Collectez des spectres de CD dans des cuvettes en quartz à haute transparen....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Sel disodique d’adénosine 5′-triphosphate hydratéSigmaaldrichA2383
Cuvette CD QuartzSTARNA21-Q-1
Spectromètre Chirascan V100 CDPhotophysique appliquéenon disponible
EDTA Sel disodique dihydratéSRLRéférence 43272
Solution de nettoyage Hellmanex IIIHellmaRéférence : 9-307-011-4-507
Chlorure de magnésium hexahydratéFisher scientifiqueM33-500
Phosphate de sodium dibasique anhydreFisher scientifiqueS374-500
Phosphate de sodium monobasique monohydratéFisher scientifiqueS369-500
Lecteur de microplaques Synergy HTBioTeknon disponible
Base TrisFisher scientifiqueBP152-500

Mots-clés

Remodeleur de la chromatine d pendant de l ATPconformation en tige boucleanalyse des spectres de dichro sme circulairecuves en quartzsoustraction de la ligne de baseplage de longueurs d onde 180 300 nmcomplexe d ions magn siumch lation l EDTA