Génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes à partir de monocytes

Résumé

Source : Sim, W. J. et al., Génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes avec des phénotypes métaboliques différents.J. Vis. Exp.(2016).

Cette vidéo montre la génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes, ou DC, à partir de monocytes humains. L’incubation des monocytes avec des facteurs de croissance et des cytokines conduit à la production de CD immatures. En réponse aux molécules régulatrices immunitaires, les CD immatures se différencient en CD tolérogènes et matures.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Isolement des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC)

1. Préparation du réactif
   1. Préparez PBS/EDTA : solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et complétez avec 2 mM d’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA). Stérilisez cette solution par filtration à travers un filtre de 0,2 μm. REMARQUE de conserver le PBS/EDTA à 4 °C et....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ficoll	GE Soins de santé	Référence : 17-1440-03	Isolation PBMC
seringue	Becton, Dickinson	302832	Isolation PBMC
Tube à centrifuger de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C	Isolation PBMC
Tube faucon de 15 mL	Faucon	352096	Isolation PBMC
Tube faucon de 50 mL	Faucon	Référence 352070	Isolation PBMC
centrifugeuse	Eppendorf	5810R	Isolation PBMC
Filtre 0,2 μm	Sartorius stedim biotech	Référence 17597	Isolation PBMC
Kit MAC	Miltenyi biotec	Référence : 130-042-201	Enrichissement des monocytes
Séparateur MiniMACS	Miltenyi biotec	Référence : 130-042-102	Enrichissement des monocytes
Eau de culture cellulaire	Invitrogen, Technologies de la vie		Culture cellulaire
RPMI	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 11875-093	Culture cellulaire
FBS	Hyclone	SH30070103	Culture cellulaire
Pénicilline-streptomycine	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 15140	Culture cellulaire
Saline tamponnée au phosphate	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 10010-031	Culture cellulaire
NEAA	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 11140-040	Culture cellulaire
Edta	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 15575	Culture cellulaire
HEPES	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 15630-080	Culture cellulaire
Pyruvate de sodium	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 11360-070	Culture cellulaire
GM-CSF	Miltenyi biotec	Tél. : 130-093-868	Culture cellulaire
L’IL-4	Miltenyi biotec	Tél. : 130-093-924	Culture cellulaire
Vitamine D3	sigma	D1530	Culture cellulaire
dexaméthasone	sigma	Réf. D2915	Culture cellulaire
Lps	sigma	L2755	Culture cellulaire
Trypan bleu	Gibco, Technologies du Vivant	Référence 15250-061	Culture cellulaire