Systèmes et composants immunitaires

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des monocytes du sang humain total par séparation immunomagnétique négative. Les monocytes isolés peuvent être utilisés pour une analyse plus poussée en aval.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des cellules de Kupffer ou des macrophages hépatiques du foie de souris. Le foie est perfusé avec une solution de digestion suivie d’une séparation par gradient de densité. Les cellules de Kupffer adhérentes isolées peuvent être utilisées pour une analyse plus approfondie.

Cette vidéo présente un protocole sans enzyme pour isoler les macrophages du ganglion de la racine dorsale (DRG) de souris à l’aide d’une technique de dissociation mécanique. Lors de l’homogénéisation du tissu DRG fraîchement collecté, des anticorps dirigés contre les récepteurs de surface cellulaire sur les macrophages sont utilisés pour marquer les cellules par fluorescence, puis effectuer une cytométrie en flux pour confirmer la présence de macrophages dans l’échantillon.

Dans cette vidéo, nous démontrons l'isolement de lymphocytes à partir d'un patch de Peyer de souris récolté. Les lymphocytes isolés peuvent être utilisés pour une analyse plus approfondie.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement de cellules mononucléées du sang périphérique, PBMC, contenant des monocytes et des lymphocytes à partir d’une couche leucocytaire humaine par centrifugation par gradient de densité. Les PBMC isolés peuvent être utilisés pour une analyse plus approfondie.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des lymphocytes B du sang périphérique humain à l’aide d’anticorps biotinylés spécifiques des lymphocytes non B et de microbilles magnétiques conjuguées à la streptavidine.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement et la culture de cellules stromales de moelle osseuse à partir des os longs de souris. Les BMSC adhérents isolés peuvent être utilisés pour une analyse plus approfondie.

Cette vidéo démontre l’isolement des lymphocytes T à partir de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) à l’aide de la technologie de tri cellulaire activé par flottabilité fonctionnalisée (BACS). La technique d’isolement implique la sélection positive des lymphocytes T CD3+ en marquant les cellules avec des anticorps anti-CD3 biotinylés et en séparant les cellules liées aux anticorps à l’aide de microbulles liées à la streptavidine.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole pour l’activation des lymphocytes T primaires humains. L’incubation de lymphocytes T naïfs avec des billes magnétiques recouvertes d’anticorps anti-CD3 et anti-CD28, suivie d’un traitement à l’interleukine-2 ou à l’interleukine-15, conduit à l’activation des lymphocytes T naïfs, à leur différenciation et à leur prolifération en lymphocytes T effecteurs ou à mémoire.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des leucocytes hépatiques marginants du foie de souris par perfusion forcée.

Cette vidéo démontre l’isolement des lymphocytes, y compris les cellules tueuses naturelles ou cellules NK, à partir du tissu hépatique humain pour une expansion sélective. La digestion enzymatique et mécanique, suivie d’une séparation par gradient de densité, favorise l’isolement des lymphocytes, y compris les cellules NK. Les lymphocytes collectés peuvent être utilisés pour l’expansion sélective des cellules NK.

Cette vidéo présente une technique d’expansion de cellules tueuses naturelles (NK) directement à partir de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) à l’aide d’une lignée cellulaire nourricière. Les PBMC sont co-cultivées avec des cellules nourricières lymphoblastoïdes génétiquement modifiées exprimant l’interleukine-21 liée à la membrane (mIL-21), et la culture est complétée par les cytokines interleukine-2 (IL-2) et interleukine-15 (IL-15). Ensemble, ce cocktail de ligands conduit à...

Cette vidéo montre la procédure d’isolement des cellules de Sertoli à partir des tubes séminifères de souris, un composant des testicules. La digestion enzymatique et les lavages répétés favorisent la libération de cellules de Sertoli dans la solution, qui peuvent être cultivées davantage pour la prolifération et la croissance.

Cette vidéo présente un protocole pour l’isolement par marquage magnétique d’une population à faible concentration de cellules T CD4+Vδ1+γδ à partir de cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC). En utilisant une combinaison d’anticorps anti-Vδ1 conjugués à la FITC, de microbilles magnétiques anti-FITC et de billes superparamagnétiques enrobées d’anticorps anti-CD4, les lymphocytes T CD4+Vδ1+ peuvent être purifiés avec succès de la population PBMC.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement de neutrophiles cytotoxiques de haute densité et de neutrophiles de basse densité à partir du sang d’une souris porteuse d’une tumeur par centrifugation discontinue par gradient de saccharose.

Cette vidéo montre la procédure d’isolement du réseau de cellules immunitaires gingivales à partir d’un modèle murin. La digestion enzymatique libère le tissu gingival des dents et de l’os attachés, qui est ensuite digéré mécaniquement, libérant les cellules immunitaires de la gencive. Les cellules isolées sont prêtes pour des expériences immunologiques.

Cette vidéo présente une méthode de lavage péritonéal pour isoler les mastocytes matures de type tissu conjonctif de la cavité péritonéale de souris adultes. Lors de l’isolement d’un mélange de cellules immunitaires primaires de la cavité péritonéale, la prolifération sélective des mastocytes est effectuée dans des conditions de culture appropriées.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole permettant d’isoler les cellules CD11b, y compris la microglie, du cerveau des petits de souris en utilisant le tri cellulaire activé magnétiquement. Les tissus cérébraux sont homogénéisés pour obtenir des suspensions unicellulaires, qui sont incubées avec des microbilles enrobées d’anticorps anti-CD11b, suivies d’une séparation sur colonne magnétique pour purifier la population de cellules CD11b+.

Cette vidéo montre la procédure d’isolement chirurgical du ganglion lymphatique drainant inguinal à partir d’un modèle murin. L’incision de la région abdominale permet d’accéder au ganglion lymphatique inguinal, qui est prélevé chirurgicalement. Le ganglion lymphatique inguinal translucide prélevé peut être utilisé pour des études immunologiques.

Cette vidéo montre une technique de dissection pour prélever des ganglions lymphatiques poplités drainants sur les pattes arrière de la souris. Les ganglions lymphatiques jouent un rôle essentiel dans le rapprochement de l’immunité innée et adaptative, et la récolte de ganglions lymphatiques intacts – avec une structure tissulaire et une viabilité cellulaire préservées – peut aider à étudier les réponses immunitaires locales et systémiques.

Cette vidéo montre l’amorçage des monocytes primaires dans les macrophages. Les monocytes humains primaires peuvent être isolés et différenciés en un phénotype pro-inflammatoire de type M1 à l’aide du facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF) ou en un phénotype anti-inflammatoire de type M2 à l’aide du facteur de stimulation des colonies de macrophages (M-CSF).

Cette vidéo décrit une méthode in vitro de génération de macrophages à partir de cellules souches pluripotentes induites humaines (iPSC). La génération de macrophages à partir d’iPSC se produit en trois étapes : (i) agrégation des iPSC en suspension pour former des corps embryoïdes (EB) tridimensionnels qui se différencient en cellules mésodermiques, (ii) formation de cellules précurseurs de macrophages à partir des EB différenciés, et (iii) différenciation des cellules précurseurs de...

Dans cette vidéo, nous démontrons une procédure pour induire la différenciation et la polarisation des monocytes dérivés du sang périphérique en macrophages M1 ou M2. L’incubation avec le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages, le lipopolysaccharide et l’interféron-gamma produit des macrophages M1 pro-inflammatoires, tandis que l’incubation avec le facteur de stimulation des colonies de macrophages et l’interleukine-4 induit la production de macrophages M2...

Cette vidéo présente un test in vitro pour générer des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) à partir de cellules progénitrices lymphoïdes communes (CLP). Lors de la co-culture de CLP purifiés avec des cellules nourricières irradiées par γ en présence d’un ligand tyrosine kinase-3 (FL) de type Fms, les CLP se différencient en pDC non adhérentes, dont la présence est confirmée par cytométrie en flux.

Cette vidéo montre la génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes, ou DC, à partir de monocytes humains. L’incubation des monocytes avec des facteurs de croissance et des cytokines conduit à la production de CD immatures. En réponse aux molécules régulatrices immunitaires, les CD immatures se différencient en CD tolérogènes et matures.

Cette vidéo démontre la différenciation des cellules stromales de la moelle osseuse (BMSC) en adipocytes. Dans le processus en deux étapes, en présence de facteurs de croissance et d’hormones spécifiques, les BMSC indifférenciés se différencient d’abord en préadipocytes. La deuxième étape impliquant un traitement au glucose et à l’insuline conduit à la formation d’adipocytes matures avec plusieurs gouttelettes lipidiques.

Cette vidéo démontre une technique de différenciation des mégacaryocytes et de formation des plaquettes. Les cellules souches progénitrices hématopoïétiques – isolées du sang de cordon ombilical humain – se différencient en mégacaryocytes matures en présence de thrombopoïétine. Les mégacaryocytes matures produisent des extensions cytoplasmiques appelées proplaquettes, qui donnent naissance à des plaquettes individuelles.

Cette vidéo présente un protocole permettant de générer des lymphocytes T fonctionnels spécifiques de l’antigène à partir de lymphocytes T immatures dérivés d’iPSC à l’aide d’un système de culture thymique tridimensionnelle. La co-culture des lymphocytes T immatures dérivés d’iPSC avec des lobes thymiques fœtaux fœtaux de souris endogènes appauvris en lymphocytes a permis de maturation réussie des lymphocytes T pour former des émigrants thymiques (iTE) dérivés de CD8αβ+ du CMH de classe I+.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole de purification des plaquettes à partir de sang total murin et leur activation ultérieure avec la thrombine, un agoniste plaquettaire. Lorsqu’elles sont analysées par cytométrie en flux, les plaquettes au repos purifiées sont caractérisées en fonction de l’expression de leur marqueur de surface cellulaire CD41, tandis que les plaquettes activées purifiées co-expriment à la fois les marqueurs de surface CD41 et CD62P.

Cette vidéo présente une technique in vitro pour générer et isoler des pièges extracellulaires neutrophiles (TNE). Les neutrophiles sont isolés du sang périphérique et stimulés avec de l’acétate de myristate de phorbol (PMA) pour produire des TNE. Au cours de l’incubation, les neutrophiles subissent un processus de mort cellulaire (NETosis) pour libérer des TNE composées de chromatine décondensée mélangée à des protéines cytoplasmiques granulaires.

Cette vidéo démontre la différenciation in vitro des cellules T auxiliaires productrices de granulocytes-macrophages-facteurs de stimulation des colonies ou de cellules T auxiliaires productrices de GM-CSF (THGM). Les lymphocytes T naïfs isolés sont stimulés pour la différenciation en THGM, ce qui est confirmé par la détection d’une production intracellulaire élevée de GM-CSF et d’une faible expression d’autres cytokines spécifiques des lymphocytes T auxiliaires.

Cette vidéo présente un test colorimétrique pour déterminer l’activité de dégranulation des mastocytes. L’enzyme libérée par les mastocytes hydrolyse le substrat et produit un produit coloré. L’activité de dégranulation des mastocytes a été mesurée comme le pourcentage de libération d’enzymes à l’extérieur de la cellule normalisé avec la teneur totale en enzymes dans la cellule.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole pour le tri basé sur la cytométrie en flux des sous-populations de lymphocytes B naïfs, de lymphocytes B mémoires et de plasmocytes plasmablastiques à partir de lymphocytes B du sang périphérique humain. Les différentes sous-populations de lymphocytes B peuvent être distinguées en fonction de la liaison d’anticorps à base de fluorophores aux récepteurs CD19, CD27 et CD38 exprimés à la surface des lymphocytes B, suivie d’un tri cellulaire.

Cette vidéo montre l’utilisation du test ELISpot pour évaluer la fonction des lymphocytes B sécrétant des anticorps, les ASC. Les anticorps sécrétés par les ASC interagissent avec les fragments d’anticorps polyclonaux liés à la membrane, qui sont détectés par les anticorps IgG ou IgM conjugués aux enzymes. La tache colorée produite dans chaque puits indique la présence de l'isotype spécifique de l'anticorps, qui est en corrélation avec l'activité sécrétoire des lymphocytes B.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole permettant d’isoler des cellules uniques de ganglions lymphatiques de drainage pancréatique murin (PDLN) et de caractériser les lymphocytes T régulateurs (Tregs) de la population unicellulaire à l’aide de la cytométrie en flux. Les Tregs sont identifiés sur la base de l’expression positive des marqueurs de surface cellulaire CD4, CD25 et Nrp1, ainsi que des facteurs de transcription nucléaire Foxp3 et Helios.

Source : Bello-Gamboa, A. et al., Imagerie de la synapse immunologique humaine.J. Vis. Exp.(2019)
Cette vidéo montre l’étude in vitro de la formation de synapses immunologiques entre une cellule présentatrice d’antigène et des lymphocytes T auxiliaires à l’aide d’un microscope à fluorescence. Les récepteurs des lymphocytes T auxiliaires interagissent avec un complexe antigène-CMH-II dans les cellules présentatrices d’antigène et forment des synapses immunologiques, suivies de mouvements de...

Dans cette vidéo, nous démontrons une technique basée sur la cytométrie en flux pour déterminer la proportion de cellules T tueuses induites par des cytokines, des cellules CIK, développées à partir d’une culture de cellules mononucléées du sang périphérique.

Cette vidéo présente une méthode d’imagerie permettant de visualiser in situ la sécrétion d’interféron-gamma (IFN-γ) dans la rate de souris. Suite à une infection bactérienne et à l’induction de l’accumulation d’IFN-γ à l’intérieur des lymphocytes T et des cellules tueuses naturelles, la rate est prélevée sur la souris. Lors de l’obtention de coupes de tissus, une immunocoloration est effectuée pour visualiser l’IFN-γ à l’intérieur des cellules.

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole pour l’immunomarquage et la visualisation par microscopie confocale des pièges extracellulaires (MET) des macrophages dans le tissu pulmonaire murin. Les macrophages résidant dans les tissus sont caractérisés par l’expression du marqueur de glycoprotéine de surface F4/80 spécifique des macrophages, tandis que les MET sont visualisés par le marquage des marqueurs MET métalloprotéinase matricielle 9, de l’histone citrullinée H3 et de la chromatine...

Cette vidéo présente une technique d’homogénéisation efficace pour générer une émulsion antigène-adjuvant afin d’induire une encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) dans un modèle murin. L’émulsion contient un auto-antigène – la glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline (MOG) – dans la phase aqueuse, entourée d’une phase huileuse continue comprenant une bactérie pathogène inactivée. L’émulsion assure une libération prolongée d’antigènes pour une réponse immunitaire prolongée.

Cette vidéo montre la visualisation des lymphocytes intra-épithéliales (IEL) γδ chez des souris transgéniques à l’aide de la microscopie confocale. L’intervention chirurgicale consiste à créer une ligne de perforation et à faire une incision longitudinale pour exposer la muqueuse intestinale et les villosités. Les souris transgéniques expriment des protéines rapporteures exclusivement dans des IEL γδ, ce qui permet leur suivi. L'imagerie intravitale capture le mouvement dynamique des IEL γδ...

Cette vidéo démontre la génération et l’isolement de microparticules dérivées des lymphocytes T, LMP, à partir de lymphocytes T après un traitement par actinomycine-D.

Cette vidéo décrit un protocole permettant d’isoler des lymphocytes T CD8+ spécifiques à des antigènes rares à l’aide de cellules présentatrices d’antigènes artificielles (aAPCs) à base de nanoparticules magnétiques fonctionnalisées avec des Ig-CMH chargées de peptides antigéniques et des anticorps anti-CD28. L’interaction des aAPCs avec les lymphocytes T CD8+ exprimant spécifiquement les récepteurs des lymphocytes T ciblant les peptides antigéniques, suivie de leur expansion in vitro, entraîne...

Cette vidéo montre comment séparer les neutrophiles des sécrétions trachéales à l’aide d’un dispositif microfluidique à canaux en spirale. Le dispositif permet une séparation efficace en fonction de la taille des cellules en utilisant des épaisseurs variables et des canaux de forme trapézoïdale. L’interaction entre les forces fait en sorte que de gros neutrophiles s’accumulent près de la paroi interne tandis que les érythrocytes et les agrégats de mucine restent près de la paroi externe,...

Dans cette vidéo, nous démontrons le radiomarquage intracellulaire des cellules T auxiliaires à l’aide d’anticorps monoclonaux conjugués aux isotopes radioactifs pour l’imagerie non invasive par tomographie par émission de positons.