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Tri cellulaire basé sur la cytométrie en flux pour différentes populations de lymphocytes B circulatoires

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Source : Tzeng, S. J. L’isolement, la différenciation et la quantification des lymphocytes B sécrétant des anticorps humains à partir du sang : ELISpot en tant que lecture fonctionnelle de l’immunité humorale. J. Vis. Exp. (2016).

Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole pour le tri basé sur la cytométrie en flux des sous-populations de lymphocytes B naïfs, de lymphocytes B mémoires et de plasmocytes plasmablastiques à partir de lymphocytes B du sang périphérique humain. Les différentes sous-populations de lymphocytes B peuvent être distinguées en fonction de la liaison d’anticorps à base de fluorophores aux récepteurs CD19, CD27 et CD38 exprimés à la surface des lymphocytes B, suivie d’un tri cellulaire.

Protocol

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Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Tri cellulaire pour la collecte de lymphocytes B naïfs, de lymphocytes B mémoires et de plasmablastes/plasmocytes (PB/PC)

  1. À l’aide de lymphocytes B du sang périphérique humain purifiés, déterminez le nombre de cellules à l’aide d’un hémocytomètre ou d’un compteur automatique de cellules.
  2. Remettre les cellules en suspension dans un tampon PBS froid à la ....

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Disclosures

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Tubes Falcon de 15 mLBD Faucon352196
Crépine à mailles de nylon bleu, 40 μmBD FauconRéférence 352340
CD19-APC anti-humainBiolégende302212clone HIB19
CD27-eFluor 450 anti-humaineBiosciencesTél. : 48-0279-42clone O323
CD38-PE-Cy7 anti-humainBiolégende303516clone HIT2
CD38-PE-Cy7 anti-humainBD Biosciences560677clone HIT2
CD45-FITC anti-humainBiolégende304006clone HI30
CD45-FITC anti-humainBD Biosciences555482clone HI30
Anti-souris/rat/humain CD27- PerCP Cy5.5Biolégende124213clone LG.3A10
CD27-PerCP Cy5.5 anti-humainBD BiosciencesRéférence 65429clone L128
CD19-FITC anti-humainMiltenyi BiotecRéférence 130-098-064clone LT19
CD19-FITC anti-humainGène TexGTX75599clone LT19
CD20-FITC anti-humainBD Biosciences555622clone 2H7
7-aminoactinomycine D (7-AAD)BD Biosciences559925
IgG humainesJackson ImmunoResearchRéférence 009-000-003

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Flow CytometryCell SortingB Cell PopulationsNaive B CellsMemory B CellsPlasmablast Plasma CellsCD19 CD27 CD38Fluorescent AntibodiesDead Cell MarkerFACS Buffer

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