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Isolement de cellules T basé sur la flottation à l’aide d’un tri cellulaire activé par flottabilité

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Source : Snow, T., et al. Isolement, activation et expansion des lymphocytes T basés sur la flottation à partir d’échantillons de cellules mononucléées de sang périphérique humain à l’aide de microbulles. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo démontre l’isolement des lymphocytes T à partir de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) à l’aide de la technologie de tri cellulaire activé par flottabilité fonctionnalisée (BACS). La technique d’isolement implique la sélection positive des lymphocytes T CD3+ en marquant les cellules avec des anticorps anti-CD3 biotinylés et en séparant les cellules liées aux anticorps à l’aide de microbulles liées à la streptavidine.

Protocol

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1. Isolement des lymphocytes T avec des microbulles par sélection positive

REMARQUE : Ce protocole détaille une approche de sélection positive CD3+ à petite échelle utilisant des SAMBs.

  1. Incuber 3 x 108 PBMC obtenus commercialement dans 2,5 mL de tampon de séparation avec un anticorps anti-CD3 biotinylé (OKT3) à une concentration de 25 ng d’anticorps par 1 million de cellules (25 ng/M). Mélangez doucement en pipetant de haut en bas et incubez à température ambiante pendant 10 min.
  2. Ajouter des microbulles de streptavidine (SAMB) dans un rapport de 0,5 (quantité de S....

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Disclosures

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Anticorps anti-CD3 humain à la biotine (OKT3)BiolégendeRéférence 317320
LeukopakBioIVTHUMANLMX100-0001129
PBMC humains normauxBioIVTHUMANHLPB-0002562
Kit de microbulles de streptavidine (comprend le tampon de séparation d'Akadeum)AkadeumRéférence 11110-000

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Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

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