Isolement de leucocytes hépatiques marginaux à partir du foie d’une souris

Résumé

Source : Sorski, L., et al. Récolte sélective de leucocytes marginaux-hépatiques. J. Vis. Exp. (2016)

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des leucocytes hépatiques marginants du foie de souris par perfusion forcée.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Protocole de la souris

1. Perfusion du foie et collecte de leucocytes MH
   1. Euthanasier l’animal avec une surdose de 8 % d’isoflurane. Par mesure de précaution, placez un tube de 15 ml contenant un tampon imbibé d'isoflurane autour de la tête de la souris jusqu'à l'ouverture de sa cavité thoracique.
   2. Fixez les membres de la souris à un lit.
   3. Ouvrez les cavités péritonéale et thoracique pour exposer le foie et le complexe cardio-pulmonaire immédiatement après l’arrêt de la respiration, en gardant intact la partie inférieure du diaphragme (pour créer une cavité thoracique drainante). Évitez de saigner pendant ce processus.
      1. Plus précisément, commencez l’incision au point médian de la partie inférieure de l’abdomen, sans endommager les organes internes, et progressez des deux côtés en diagonale vers les côtes, en les coupant jusqu’aux niveaux supérieurs de la cavité thoracique.
   4. Retirez les intestins et placez-les à l'extérieur de l'animal à la droite de l'expérimentateur, pour exposer la veine porte.
   5. Insérez une aiguille de 30 g, reliée à une pompe péristaltique, dans la veine porte rostrale à la veine splénique.
   6. Coupez la veine cave inférieure au-dessus du diaphragme pour permettre le drainage et la collecte du perfusat de la cavité thoracique.
   7. Allumez la pompe péristaltique à une vitesse d’environ 3 ml/min et prélevez délicatement les 3 premiers ml de perfusat contaminé par du sang provenant de la cavité thoracique.
   8. Jetez ce perfusat. Répétez un tel lavage si nécessaire, en utilisant une solution saline, et seulement ensuite commencez à recueillir le perfusat de foie.
   9. Relancez la perfusion à une vitesse allant jusqu’à 4 ml/min et prélevez 10 ml de perfusat dans la cavité thoracique à l’aide d’un papillon relié à une seringue.
   10. Terminez la perfusion lorsque la couleur du foie devient brun clair.

2. Extraction des leucocytes

1. Centrifuger le perfusat pendant 10 min à 400 x g.
2. Aspirez le surnageant.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pompe péristaltique Autoclud
Aiguille papillon	OMG		26G
Aiguille papillon	OMG		21G * 3/4 "
seringue	La solution Pic		1 ml
seringue	La solution Pic		2,5 ml
seringue	La solution Pic		5 ml
seringue	La solution Pic		10 ml
seringue	La solution Pic		25 ml
Pince à bords arrondis
ciseaux
Hémostat
Pinces à tissus