Méthode de dissection pour prélever des ganglions lymphatiques drainants poplités murins pour l’imagerie ex vivo

Résumé

Source : Rezende, R. M., et al. Visualisation de la structure des ganglions lymphatiques et de la localisation cellulaire à l’aide de la microscopie confocale ex-vivo. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre une technique de dissection pour prélever des ganglions lymphatiques poplités drainants sur les pattes arrière de la souris. Les ganglions lymphatiques jouent un rôle essentiel dans le rapprochement de l’immunité innée et adaptative, et la récolte de ganglions lymphatiques intacts – avec une structure tissulaire et une viabilité cellulaire préservées – peut aider à étudier les réponses immunitaires locales et systémiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Intervention chirurgicale pour enlever le ganglion lymphatique drainant poplité

1. Euthanasier des souris par asphyxie au CO₂ suivie d’une luxation cervicale.
2. Immobiliser les souris en position couchée sur la scène acrylique à l’aide d’un ruban adhésif et appliquer de l’huile minérale à l’aide d’un coton-tige dans le mollet et le genou (figure 1A-D).
3. Effectuez une incision médiane dans le mollet du talon au genou (Figure 1E, F).
4. Dissocier la musculature du mollet de la peau (Figure 1F, G).
5. Exposer la fosse poplitée (Figure 1G). Le ganglion lymphatique poplité apparaîtra comme une sphère translucide dans la fosse poplitée.
6. Enlever le ganglion lymphatique poplité à l’aide d’une pince incurvée de microchirurgie (Figure 1G).
7. Alternativement, tournez la souris en position couchée et approchez-vous de la fosse poplitée entre le biceps fémoral et le semi-tendineux pour l’ablation du LN poplité en effectuant une incision médiane dans le mollet du talon au genou suivie d’une dissociation de la musculature du mollet de la peau.
   note: La fosse poplitée est une dépression peu profonde située à l’arrière de l’articulation du genou. Ouvrez avec précaution pour voir le ganglion lymphatique poplité.

Résultats

Figure 1 : Préparation des ganglions lymphatiques poplités. (A, B) Injection sous-cutanée d’un mélange maître d’anticorps FACS dans le coussinet de la patte. (C, D) 3 h après l’injection, euthanasier la souris, immobiliser la souris sur une plaque acrylique avec du ruban adhésif (C) et appliquer de l’huile minérale sur la peau abdominale pour éviter le dépôt de fourrure autou...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîte de culture Cellview	Greiner-Bio	627861	35x10 mm avec fond en verre
Lingettes Kimwipes	Marque scientifique Kimtech	Référence 7557	taille 21 x 20 cm / 100 feuilles par boîte
Pince incurvée en microchirurgie	Instruments chirurgicaux WEP	Sur mesure	12,5 cm
Ciseaux incurvés en microchirurgie	Instruments chirurgicaux WEP	Sur mesure	11,5 cm