Dynamique des organites dans les lymphocytes B après activation avec des billes enrobées d’antigène

Résumé

Source : Ibañez-Vega, J., et al., Étude de la dynamique des organites dans les lymphocytes B lors de la formation des synapses immunitaires. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous décrivons une méthode pour étudier la dynamique des organites dans les lymphocytes B suite à leur activation avec des microbilles enrobées d’antigène.

Protocole

REMARQUE : Les étapes suivantes ont été effectuées à l’aide de cellules B IIA1.6.

1. Activation des lymphocytes B avec des billes recouvertes d’antigène

1. Préparation de billes enrobées d’antigène
   1. Pour activer les lymphocytes B, utilisez des billes NH₂ enrobées de manière covalente avec de l’antigène (billes enrobées d’Ag), qui sont préparées à l’aide de 50 μL (~20 x 10⁶ billes) de 3 μm de₂ billes NH avec des antigènes activateurs (BCR-ligand+) ou non activateurs (BCR-ligand-).
   2. Pour l'IIA1.6, les lymphocytes B utilisent le fr....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Cellules de lymphome B de souris IIA1.6 (variante A20)	ATCC	TIB-208	Lymphome murin à cellules B d’origine Balb/c qui exprime à sa surface une BCR contenant des IgG sans FcγIIR
100 % méthanol	Fisher Scientific	Réf. A412-4
Verres de couverture de 10 mm de diamètre, épaisseur n° 1 circulaire	Marienfield-Superior	Référence 111500
Amino-Dynabeads	ThermoFisher	14307D
Anti-péricentrine	Abcam	AB4448	Dilution 1:200 recommandée mais doit être optimisée
Anti-rab6	Abcam	AB95954	Dilution 1:200 recommandée mais doit être optimisée
Anti-sec61	Abcam	AB15575	Dilution 1:200 recommandée mais doit être optimisée
Bsa	Winkler	BM-0150
Microsphères aminées de polybilles 3,00 μm	Polysciences	Référence 17145-5
Poly-L-lysine	sigma	Réf. P8920	Diluer avec de l’eau stérile
Réf. RPMI-1640	Industries biologiques	Référence 01-104-1A
Triton X-100	Merck	Référence 9036-19-5
Tube 50 ml	Corning	353043