Effet de l’anticorps anti C-fms sur l’ostéoclastogenèse dans les cellules de moelle osseuse de souris in vitro

Résumé

Source : Marahleh, A., et al. Effet de l’anticorps anti-c-fms sur la formation et la prolifération des précurseurs d’ostéoclastes in vitro. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous démontrons l’effet de différentes concentrations d’anticorps anti-c-fms sur l’ostéoclastogenèse, qui est le processus de formation des ostéoclastes à partir des progéniteurs des ostéoclastes.

Protocole

1. Génération de BMM

1. Semez 1 x 10⁷ cellules/10 mL dans une boîte de culture de 10 cm et ajoutez du M-CSF 100 ng/mL. La concentration finale de M-CSF est de 100 ng/mL de milieu de culture. Incuber la culture à 37 °C, 5 % de CO₂ pendant 3 jours.
2. Après 3 jours, retirer le milieu de culture, laver vigoureusement les cellules avec 10 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) deux fois pour éliminer les cellules non adhérentes, ajouter 5 ml de trypsine-EDTA à température ambiante 0,02 % dans du PBS et incuber à 37 °C, 5 % de CO₂ pendant 5 min.
3. Détachez les cellules par un pipetage min....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Anticorps anti-c-Fms			AFS98, un anticorps c-Fms monoclonal, antimurin, de rat (IgG2a)
RANKL	PEPROTECH	315-11	Ligand sRANK murin recombinant, Source : E.coli
M-CSF			1/10 vol de surnageant de culture de lignées cellulaires CMG14–12 à 5X106 cellules dans une boîte de culture en suspension de 10 cm.
α-MEM	Wako		avec de la L-Glutamine et du rouge de phénol
Sérum fœtal bovin	Biowest	S1820-500	Sérum fœtal bovin origine française
Plat de culture	Corning		Plat de style 100 mm x 20 mm
Plaque à 96 puits	Thermofisher Scientific		Nun clon Delta surface