Un système de culture d’organes intestinaux ex vivo pour étudier les interactions hôte-microbiote

Résumé

Source : Azriel, S., et al. Un système de culture d’organes intestinaux pour l’analyse des interactions hôte-microbiote. J. Vis. Exp. (2021).

Dans cette vidéo, nous décrivons la méthodologie de mise en place d’un système de culture d’organes intestinaux ex vivo pour étudier les interactions entre des fragments de tissu intestinal de souris et des bactéries intestinales spécifiques. Le dispositif se compose de deux paires de ports d'entrée-sortie, le premier connectant la lumière du tissu intestinal et y fournissant la suspension bactérienne spécifique, et le second fournissant en permanence des fluides aux puits du dispositif pour maintenir la viabilité tissulaire ex vivo.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation de l’expérience

1. Fabrication du dispositif de culture d’organes intestinaux (3 jours)
   1. À l’aide d’une imprimante 3D, imprimez les moules en plastique réutilisables pour le dispositif de culture d’organes (le dispositif a 6 puits, avec 24 petits et grands trous, et pour le couvercle du couvercle de l’appareil).
      REMARQUE : Ces moules en plastique peuvent être utilisés pour la fabrication de nombr....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
appareil
Aiguille émoussée de calibre 18	Mcmaster	Référence 75165a754
Aiguille émoussée de calibre 22	Mcmaster	Référence 75165a758
Scellant adhésif tout usage 100 % silicone	Dap	688
Dessiccateur sous vide cubique VDC-21+ 2 étagères		AAAD4021
Lame en verre de 1 mm d’épaisseur	Corning	Référence 2947-75X50
Mini incubateur im-10		AAH24315K
MPC 301E POMPE À VIDE		VI-412711
Bouchons d’accouplement de tube à rotation rapide en plastique	Mcmaster	Référence 51525K121
Douilles d’accouplement de tube à rotation rapide en plastique	Mcmaster	Référence 52525K211
Sylgard 184 Élastomère de silicone	Dow		Polydiméthylsiloxane, PDMS
tubage	Mcmaster	Référence 6516T11
Zortrax M200	Zortrax		Zortrax Z-SUITE, Autodesk Fusion 360
Zortrax M200 Matériaux : z-ultrat	Zortrax
Douleur moyenne
Supplément B27 (50x), T sans sérum	Thermo Fisher Scientific	17504044
Milieu Dulbecco's modifié d'Iscove avec rouge de phénol (1x)	Thermo Fisher Scientific	12440061
Tampon HEPES (1M)	Thermo Fisher Scientific	15630056
Sérum Knock-Out	Thermo Fisher Scientific	10828028
Supplément N2 (100x)	Thermo Fisher Scientific	A1370701
Acide aminé non essentiel (100x)	Thermo Fisher Scientific	11140035
Outils chirurgicaux
Grands ciseaux	Aseltech	11-00-10
Pince tranchante	F.S.T	Référence 11297-10
Fil chirurgical tressé en soie	Smi	Référence 8010G
Ciseaux droits	F.S.T	Référence 14091-09
Pince fine	F.S.T	Référence 11051-10
Système d’organes
Filtre 0,1 μm	Gène de la vie
Filtre 0,22 μm	Gène de la vie
Seringue Luer-Lock de 5 mL	B-D	309649
Stéréomicroscope Greenough	Zeiss	Stemi 305
Réchauffeur d’air de précision à recirculation « CUBE »		CUBE-2-LIS
Pompe à seringue	Systèmes de pompe New Era Inc	NEP-NE-1600-EM