Génération d’une plaie cutanée excisionnelle dans un modèle murin par biopsie à l’emporte-pièce

Résumé

Source : Anderson, L. S. et al., Un modèle de souris pour évaluer la réponse immunitaire innée à l’infection à Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre une procédure de biopsie à l’emporte-pièce pour créer une plaie précise dans un modèle murin. L’excision expose la couche sous-cutanée de la peau, fournissant un site approprié pour l’étude des réponses immunitaires à l’infection pathogène localisée.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Source et boîtier de la souris

1. Dérivez des souris Lysozyme M-enhanced green fluorescent protein (LysM-eGFP) sur un fond génétique C57BL/6J comme décrit précédemment. Dérivation de la réponse primaire de différenciation myéloïde LysM-EGFP× 88 (MyD88)-/- en croisant des souris LysM-EGFP avec des souris MyD88-/- sur un fond C57BL/6J.
2. Souris domestiques dans un vivarium. Pour ces études, les animaux ont été hébergés à l’Université de Californie à Davis en groupes avant l’opération et individuellement après l’opération. Utilisez des souris âgées de 10 à 16 semaines.

2. Plaie cutanée excisionnelle

1. Administrer 100 μL de chlorhydrate de buprénorphine à 0,03 mg/mL (~0,2 mg/kg) à chaque souris par injection intrapéritonéale.
2. Vingt minutes après l’injection, placez 2 à 4 souris dans une chambre avec 2 à 3 litres d’oxygène par minute (LPM) avec 2 à 4 % d’isoflurane. Une fois que les souris sont complètement anesthésiées, transférez-les une à la fois dans un cône nasal connecté à 2-3 LPM d’oxygène avec 2-4 % d’isoflurane. Vérifiez que les souris sont complètement anesthésiées en pinçant fermement chaque patte arrière entre le pouce et l’index. Passez à l’étape suivante si l’animal ne répond pas au pincement.
3. Rasez une section de 1 pouce sur 2 pouces à l’arrière de la souris avec une tondeuse électrique et nettoyez la zone des coupures de fourrure à l’aide d’une lingette ou d’une gaze propre. Évitez d’utiliser une lotion dépilatoire car elle peut provoquer une inflammation excessive.
4. Nettoyez d’abord le dos de la souris avec de la gaze imbibée de povidone iodée à 10 %, puis avec de la gaze imbibée d’éthanol à 70 %. Nettoyez la zone en spirale, en vous déplaçant vers l’extérieur à partir du centre de la zone chirurgicale. Attendez environ 1 minute que la zone chirurgicale sèche avant la chirurgie.
5. Tenez le dos rasé de la souris sans serrer entre deux doigts et appuyez fermement sur une biopsie stérile à l’emporte-pièce de 6 mm au centre de la zone chirurgicale préparée. Ne tirez pas sur la peau tendue.
   1. Tournez la biopsie à l’emporte-pièce pour créer un contour circulaire sur la peau qui traverse complètement la peau dans au moins une section du contour. Veillez à ne pas couper le fascia ou le tissu sous-jacent.
   2. Utilisez des ciseaux stériles et des pinces pour couper l’épiderme et le derme en suivant le motif circulaire imprimé par la biopsie à l’emporte-pièce.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Poinçon de biopsie jetable de 6 mm	Integra Miltex	33 à 36
Chlorhydrate de buprénoprhine injectable	Approvisionnement médical occidental	Référence 7292	0,3 mg/mL
Souris C57BL/6J	Laboratoire Jackson	664
Souris LysM-eGFP	Thomas Graff, Albert Einstein, Collège de New York	Na
Souris MyD88 KO	Laboratoire Jackson	Référence 9088
Éponges non tissées	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Povidone iode 10 % solution	Aplicare	697731