Induction de la maladie du greffon contre l’hôte dans des modèles murins par greffe allogénique de moelle osseuse et de cellules spléniques

Résumé

Source : Buchele, V., et al. Induction de la maladie du greffon intestinal contre l’hôte et son évaluation mini-endoscopique chez les souris vivantes. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo démontre l’induction de la maladie du greffon intestinal contre l’hôte, GvHD, chez une souris receveuse irradiée létalement à l’aide de cellules souches hématopoïétiques allogéniques allogéniques et de lymphocytes T alloréactifs spléniques induisant la GvHD. Ce protocole permet d’établir un modèle de GvHD intestinale aiguë sévère afin de comprendre le mécanisme de la maladie et de développer des options thérapeutiques innovantes.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction GvHD

1. Jour 0 : Irradiation corporelle totale des souris receveuses
   1. Utilisez des souris femelles CD45.2+ H2kd+ BALB/c âgées d’au moins 10 semaines comme receveuses.
   2. Pesez et enregistrez le poids des souris receveuses avant l’induction de la GvHD.
      note: Assurez-vous que le receveur a un poids corporel minimal de 20 g. Le poids corporel de départ servira....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Irradiateur gamma BIOBEAM 2000	Gamma-Service Meical GmbH
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich Co. LLC.	D8662-6x500ML
Pince Semken (longueur : 13 cm ; pointes dentelées et incurvées)	Outils scientifiques fins	Référence 11009-13
Ciseaux fins trempés (longueur : 8,5 cm ; pointes droites ; tranchant : 24 mm)	Outils scientifiques fins	Référence 14090-09
RPMI-1640 Moyen	Sigma-Aldrich Co. LLC.	R8758-500ML
Aiguille hypodermique (26G)	B. Braun Melsungen AG	4657683
Seringue de 1 mL	B. Braun Melsungen AG	Référence 9166017V
Tube de 50 mL	Sarstedt Ag & Co.KG	6,25,47,254
Crépine de cellules avec un tamis à mailles de 40 μm	BD Faucon	Référence 352340
Seringue à insuline avec intérieur stérile (30G)	Bd	324826
Kit d’isolement de cellules Pan T II, souris	Miltenyi Biotec GmbH	Référence : 130-095-130	séparation de cellules magnétiques pour isoler les lymphocytes T spléniques
CD90.2 Microbilles de souris	Miltenyi Biotec GmbH	Référence : 130-049-101	séparation de cellules magnétiques pour isoler les cellules de moelle osseuse appauvries en lymphocytes T
Pince à biopsie	KARL STORZ SE & Co KG	61071 ZJ	partie du dispositif expérimental de coloscopie
Sel disodique d’acide éthylènediaminetétraacétique dihydraté (Na2EDTA)	Carl Roth GmbH & Co.KG	Référence 8043.2	ingrédient du tampon de lyse ACK
Alexa Fluor 700 anti-souris CD45.2 Anticorps (clone : 104 ; lot : B252126 ; Numéro de référence : AB_493731)	Biolégende	109822
Anticorps anti-souris CD45.1 PE/Cy7 (clone : A20 ; lot : B217246 ; Numéro d’identification de la traduction : AB_1134168)	Biolégende	Référence 110730
Anticorps anti-souris CD8a APC/Cy7 (clone : 53-6,7, lot : B247008 ; Numéro de référence : AB_312753)	Biolégende	100714
Forane / Isofluran	AbbVie Inc.	Réf. B506
Sérum bovin filtré	Pan Biotec	Réf. P40-47500	ingrédient du tampon FACS