Canulation des canaux lymphatiques mésentériques dans un modèle de rat pour prélever de la lymphe

Résumé

Source : Trevaskis, N. L., et al. Le modèle de rat canulé du canal lymphatique mésentérique : application à l’évaluation du transport lymphatique intestinal des médicaments. J. Vis. Exp. (2015).

Cette vidéo montre une technique de canulation du canal lymphatique mésentérique chez le rat. Cette méthode permet d’accéder directement à tout le volume des composants présents dans le liquide lymphatique.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Canulation du canal lymphatique mésentérique

1. Placez l’animal avec son côté droit tourné vers l’opérateur. Effectuez la chirurgie avec ou sans l’aide d’un microscope chirurgical au besoin.
2. Ouvrez la couche supérieure de la paroi musculaire abdominale avec une incision droite de 4 cm s’étendant de la ligne médiane (processus xiphoïde) au flanc droit à environ 2 cm sous la cage thoracique (marge costale) à l’aide d’une lame de scalpel stérile (voir Figure 1B).
3. Ouvrez les couches restantes de la paroi musculaire abdominale de 4 à 5 mm latéralement vers la ligne médiane du flanc droit avec une petite paire de ciseaux chirurgicaux (voir Figure 1B).
4. Rétractez l’intestin grêle sous la paroi musculaire abdominale gauche et maintenez-le en place à l’aide de 2 à 3 morceaux de gaze stérile saturés de solution saline normale.
5. Placez le rat sur une seringue en plastique de 10 ml placée horizontalement sous le dos du rat au niveau du rein droit pour faciliter la visualisation du canal lymphatique mésentérique.
6. Localisez le canal lymphatique mésentérique supérieur : un vaisseau d’environ 0,5 à 1 mm de diamètre qui est perpendiculaire au rein droit et immédiatement rostral et parallèle à l’artère mésentérique (un vaisseau sanguin rouge foncé pulsant ; voir la figure 1C).
   REMARQUE : Chez les rats non à jeun ou pré-dosés à l’huile, le récipient est blanc, opaque et plus facile à visualiser que chez les rats à jeun chez qui il est assez translucide.
7. Inspectez la zone immédiatement caudale du grand canal lymphatique mésentérique supérieur et de l’artère mésentérique pour déterminer si un deuxième canal lymphatique accessoire plus petit est présent. S’il y en a, bloquez l’écoulement de la lymphe dans le canal en sectionnant le canal et en l’occlusant avec de la superglue, ou en attachant une suture autour du conduit, pour vous assurer que tout le volume de lymphe s’écoulant de l’intestin est recueilli à partir du canal lymphatique mésentérique supérieur.
8. Passez une paire de pinces droites à travers le lit adipeux péri-rénal à la marge inférieure du rein droit et à travers les couches de tissu conjonctif immédiatement sous la veine cave, dans une direction parallèle au canal lymphatique mésentérique supérieur.
9. À l’aide de l’extrémité de la pince, saisissez la canule lymphatique et tirez-la à travers le lit adipeux péri-rénal avec une extrémité immédiatement adjacente au canal lymphatique mésentérique et l’autre extériorisée de l’animal au niveau du rein droit.
10. Isolez le canal lymphatique mésentérique des couches sus-jacentes de tissu conjonctif et adipeux par dissection émoussée. Veillez à ne pas percer ou endommager le canal lymphatique.
11. Après avoir isolé le canal lymphatique, faites un petit trou dans le canal lymphatique avec des micro-ciseaux, la pointe pointue de la pince du bijoutier ou une aiguille de 25 G. Veillez à ne pas sectionner complètement le vaisseau.
12. Assurez-vous que la canule lymphatique est complètement remplie d’une solution anticoagulante (à l’aide d’une seringue et d’une aiguille de 25 G) sans espace d’air. Insérez la canule lymphatique à environ 2 à 4 mm à l’intérieur du canal lymphatique mésentérique par le petit trou à l’aide d’une petite paire de pinces.
13. Observez la canule lymphatique pendant quelques minutes. Observez un écoulement progressif de la lymphe intestinale à partir de l’extrémité collectrice libre de la canule si la canulation réussit. Si la canulation ne réussit pas, répétez les étapes 1.8 à 1.12.
14. Si la canulation réussit, fixez la canule en plaçant une petite goutte d’adhésif vétérinaire sur le trou d’entrée dans le canal lymphatique. Veillez à ne pas obstruer le récipient par l’application d’un excès d’adhésif vétérinaire.
15. En attendant que l’adhésif vétérinaire prenne, observez l’écoulement de la lymphe pendant plusieurs minutes pour vous assurer que la procédure de canulation a réussi. Une fois certain du succès de la canulation, retirez soigneusement les morceaux de gaze qui ont été placés dans la cavité abdominale et placez l’intestin grêle dans sa position d’origine.
16. Prépesez les tubes de prélèvement lymphatique, étiquetez les tubes pour le prélèvement d’échantillons de lymphe et de sang et ajoutez une solution anticoagulante. Ajouter suffisamment de solution anticoagulante pour obtenir une concentration finale de 1 mg/ml d’EDTA dans de l’eau stérile ou de 10 à 20 UI/ml d’héparine dans la lymphe ou le sang recueillis.
17. Placez un tube de prélèvement lymphatique contenant un anticoagulant (étape 1.16) à l’extrémité de la canule pour recueillir la lymphe qui s’écoule librement.
18. Ensuite, canulez le duodénum pour l’infusion de solutions et/ou de formulations de réhydratation.

Résultats

Graphique 1. Photographies de (A) l’abdomen rasé en vue de la canulation du canal lymphatique, (B) la paroi musculaire abdominale ouverte par une incision droite de 4 cm s’étendant de la ligne médiane au flanc droit pour accéder au canal lymphatique, et (C) le canal lymphatique mésentérique supérieur (en cercle jaune) perpendiculaire au rein d...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution saline stérile	Baxter Soins de santé	AHB 1307	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple ici : sacs salins Baxter 100 ml, boîte de 50
70 % d’éthanol dans l’eau	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Solution de gluconate de chlorhexidine (Microshield 4)	Livingstone International	JJ60243L	N’importe quelle marque peut être utilisée. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche =JJ60243L
Solution de bétadine	Livingstone International	BU0510	N’importe quelle marque peut être utilisée. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche =BU0510
Ilium Ketamil (Kétamine 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
Héparine (35000I.U. dans 35 mL	SigmaPharmaceuticals	Référence 337220	http://www.sigmaco.com.au
Canule en polyéthylène (PE) d’un diamètre extérieur de 0,96 mm x d’un diamètre intérieur de 0,58 mm	Extensions de microtubes	PE8050	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est un tube PE 0,96 x0,58 mm, 30 m
Canule en polyéthylène (PE) diamètre extérieur 0,8 mm x ID 0,5 mm	Extensions de microtubes	PE9658	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est un tube PE 0,8 x0,5 mm, 30 m
Marqueurs	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Adhésif vétérinaire	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Aiguilles de calibre 23	Livingstone International	DN23GX0.75LV	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT= 6&recherche=DN23GX0.75LV
Aiguilles de calibre 25	Livingstone International	DN25GX1.0LV	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche= DN25GX1.0LV
Seringue de 1 ml	Livingstone International	T3SS01TA	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple : seringue Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/boîte. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche =T3SS01TA
Seringue de 10 ml	Livingstone International	T3SS10SA	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple, ici : seringue Terumo 10 ml Slip 100/boîte. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche =T3SS10SA
Tampons de gaze	Livingstone International	GSC075	N’importe quelle marque peut être utilisée et coupée à la taille requise. L’exemple ici est des cotons-tiges remplis de coton 7,5 x 7,5 cm, 8 plis. http:// www.livingstone.com.au/ ? PG=search_result&CAT=6&recherche =GSC075
Coussin chauffant	Ratek	WT1	N’importe quelle marque qui maintient la température à 37 ° C peut être utilisée. L’exemple ici est le plateau chauffant Ratek.
Microscope chirurgical	Zeiss	Référence 495005-0014-000	N’importe quelle marque peut être utilisée. C’est le cas du stéréomicroscope Zeiss Stemi 2000-C avec support S, double spot et KL 300 LED. https:// www.micro-shop.zeiss.com/ ? l=fr&p=us&f=e&i=10143
1 x petits ciseaux chirurgicaux	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 14060-09	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est les ciseaux fins FST, 9 cm avec tranchant de 21 mm, tranchants, droits. http://www.finescience.ca/ Pages-spéciales/Products.aspx ? ProductId=40&CategoryId=17
2 x pince avec pointe incurvée dentelée	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 11001-13	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est une pince à motif standard FST 13 cm avec pointe incurvée de 2,8 x 1,4 mm. http://www.finescience.ca/ Pages-spéciales/Products.aspx ? ProductId=405&CategoryId=32