Canulation intraduodénale dans un modèle de rat pour des études d’immunopathologie

Résumé

Source : Trevaskis, N. L. et al., The Mesenteric Lymph Duct Culated Rat Model : Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport.J. Vis. Exp.(2015)

Cette vidéo montre la canulation intraduodénale dans un modèle de rat. Après avoir anesthésié le rat, le duodénum est localisé et une petite ponction est créée. Une canule en forme de J avec une pointe biseautée est soigneusement insérée et sécurisée, et l’incision est fermée. Le modèle de rat canulé permet une perfusion intra-intestinale pour les études d’immunopathologie.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparatifs la veille de l’intervention chirurgicale

1. Jeûnez le rat la nuit avant l’opération si nécessaire. Assurez-vous que le rat a un accès libre à l’eau.
2. Préparez les solutions à administrer au rat.
   1. Préparez une solution de réhydratation telle qu’une solution saline stérile ou une solution Ringers.
   2. Préparez des solutions anesthésiques au besoin. L’anesthésique utilisé dans les expériences décrites ici consistait en un « cocktail 1 » préparé en combinant 1,9 ml de kétamine 100 mg/ml, 0,5 ml de xylazine 100 mg/ml, 0,2 ml d’acépromazine 10 mg/ml et 2,5 ml de solution saline et le « cocktail 2 » composé de 1 ml de kétamine 100 mg/ml et de 0,1 ml d’acépromazine 10 mg/ml. L’isoflurane ou le sévoflurane inhalé peuvent être préférés car ils peuvent fournir un plan chirurgical d’anesthésie pendant une période de temps plus longue.
3. Préparez une solution anticoagulante contenant 10 mg/ml d’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) dans de l’eau stérile ou 10 UI/ml d’héparine dans une solution saline pour rincer la canule lymphatique. Préparez également une solution anticoagulante contenant 2,5 à 10 UI/ml d’héparine dans une solution saline pour rincer la canule de l’artère carotide.
4. Préparez la canule en polyéthylène pour l’insertion dans le duodénum (0,96 mm de diamètre extérieur, 0,58 mm de diamètre intérieur)
   1. Coupez la canule à la longueur requise (généralement 25 à 30 cm pour la canule duodénale) et placez un biseau à l’extrémité de la canule à l’aide d’une lame chirurgicale stérile (voir Figure 1).
      note: Cela augmente la facilité d’insertion de la canule et réduit l’incidence du blocage de la canule après l’insertion.
   2. Placez un point d’ancrage en forme de J dans la canule intraduodénale en enroulant une petite partie de la canule sur elle-même, en la chauffant avec un briquet ou une plaque chauffante, puis en la coupant à la bonne taille (voir Figure 1).
5. Fixez la canule lymphatique à une aiguille et une seringue de 25 G contenant une solution anticoagulante (préparée à l’étape 1.3). Remplissez la canule lymphatique avec la solution anticoagulante et laissez la solution dans la canule pendant la nuit (O/N) pour réduire l’incidence de la formation de caillots dans la canule lymphatique pendant le prélèvement de la lymphe.
6. Préparez des tubes pour le prélèvement d’échantillons de lymphe et de sang. Prépesez les tubes de prélèvement lymphatique, étiquetez les tubes pour le prélèvement d’échantillons de lymphe et de sang et ajoutez une solution anticoagulante. Ajouter suffisamment de solution anticoagulante pour obtenir une concentration finale de 1 mg/ml d’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) dans de l’eau stérile ou de 10 à 20 UI/ml d’héparine dans la lymphe ou le sang recueillis.

2. Préparatifs immédiatement avant le début de l’intervention chirurgicale

1. Vérifiez les canules en les rinçant avec une solution saline stérile ou une solution anticoagulante pour vous assurer qu’elles sont perméables.
2. Préparez le rat à l’intervention chirurgicale.
   1. Anesthésier le rat tout au long de la chirurgie et de la période de prélèvement d’échantillons.
      1. Par exemple, initier l’anesthésie par injection sous-cutanée de 1,5 ml/kg de Cocktail I (à partir de l’étape 1.2.2) dans un pli cutané à l’arrière du cou du rat à l’aide d’une seringue de 1 ml attachée à une aiguille de 25 G. Maintenir l’anesthésie par injection intrapéritonéale de 0,44 ml/kg de Cocktail 2 (à partir de l’étape 1.2.2) environ toutes les heures si nécessaire, à l’aide d’une seringue de 1 ml attachée à une aiguille de 25 G.
      2. Avant de commencer la chirurgie, assurez-vous que la profondeur de l’anesthésie est suffisante en observant la fréquence respiratoire, le mouvement des moustaches, le tonus musculaire et les réponses à des stimuli tels que le pincement du pied. Administrer une anesthésie supplémentaire au besoin.
   2. Rasez la fourrure des régions chirurgicales, qui comprennent le côté droit de l’abdomen, pour la canulation duodénum.
   3. Nettoyez les régions chirurgicales de manière aseptique à l’aide d’une solution de povidone iodée ou d’une solution de chlorhexidine et d’un gommage à l’éthanol à 70 %. Répétez cette opération 3 fois pour chaque région, en terminant par un nettoyage final avec de l’éthanol à 70 %.
3. Placez l’animal en position couchée dorsale sur un drap propre au-dessus d’un coussin chirurgical chauffé (37 °C).

3. Canulation du duodénum

1. Placez l’animal avec son côté droit tourné vers l’opérateur. Effectuez la chirurgie avec ou sans l’aide d’un microscope chirurgical au besoin.
2. Ouvrez la couche supérieure de la paroi musculaire abdominale avec une incision droite de 4 cm s’étendant de la ligne médiane (processus xiphoïde) au flanc droit à environ 2 cm sous la cage thoracique (marge costale) à l’aide d’une lame de scalpel stérile (voir Figure 2B).
3. Ouvrez les couches restantes de la paroi musculaire abdominale de 4 à 5 mm latéralement jusqu’à la ligne médiane du flanc droit avec une petite paire de ciseaux chirurgicaux (voir Figure 2B).
4. Rétractez l’intestin grêle sous la paroi musculaire abdominale gauche et maintenez-le en place à l’aide de 2 à 3 morceaux de gaze stérile saturés de solution saline normale.
5. Fixez la canule duodénum à une seringue (par exemple, 10 ml) remplie de la solution de réhydratation.
6. Identifiez le duodénum comme la section rose vif (avec plus de vaisseaux sanguins) de l’intestin grêle, qui, en tirant doucement vers le bas, révèle l’estomac.
7. Faites un petit trou de perforation dans le duodénum à environ 2 cm sous la jonction de l’estomac et du duodénum (le pylore) à l’aide d’une aiguille stérile de 23 G.
8. Insérez l’extrémité crochue en forme de J de la canule duodénale à travers le trou de perforation. Fixez-le en place avec une goutte de colle cyanoacrylate.
9. Commencez l’hydratation du rat en fixant la canule à la seringue de réhydratation chargée dans une pompe à perfusion. Selon la littérature, les taux de réhydratation varient de 0,5 à 3 ml/h.
10. Une fois la canulation lymphatique et duodénum terminée, fermez l’incision dans la paroi musculaire abdominale avec des sutures. Fermez ensuite l’incision cutanée en appliquant quelques gouttes d’adhésif tissulaire (cyanoacrylate) le long du côté de l’incision et en pinçant la peau des deux côtés de l’incision ensemble.

Résultats

Graphique 1. Représentation schématique de la forme de l’extrémité biseautée d’une artère carotide ou d’une canule lymphatique, et de l’extrémité biseautée en forme de J d’une canule duodénale.

Graphique 2. Photographies de (A) l’abdomen ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution saline stérile	Baxter Soins de santé	AHB 1307	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple ici : sacs salins Baxter 100 ml, boîte de 50
70 % d’éthanol dans l’eau	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Solution de gluconate de chlorhexidine (Microshield 4)	Livingstone International	JJ60243L	N’importe quelle marque peut être utilisée. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Solution de bétadine	Livingstone International	BU0510	N’importe quelle marque peut être utilisée. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Ilium Ketamil (Kétamine 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	TRO-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 injectable (acépromazine 10 mg/ml)	PROVET VICTORIA	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Héparine (35000I.U. dans 35 mL)	Sigma Pharmaceuticals	Référence 337220	http://sigmaco.com.au/
Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) sel disodique dihydraté	Sigma-Aldrich	E1644	N’importe quelle marque peut être utilisée. Un exemple ici est le sel disodique d’EDTA de Sigma.
Canule en polyéthylène (PE) d’un diamètre extérieur de 0,96 mm x d’un diamètre intérieur de 0,58 mm	Extensions de microtubes	PE8050	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est un tube PE 0,8 x 0,5 mm, 30 m
Canule en polyéthylène (PE) : d.E. 0,8 mm x d.i. 0,5 mm	Extensions de microtubes	PE9658	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est un tube PE 0,96 x 0,58 mm, 30 m
règle	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Marqueurs	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
briquet	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Colle cyanoacrylate	quelconque		Toutes les marques peuvent être utilisées
Aiguilles de calibre 23	Livingstone International	DN23GX0.75LV	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0.75LV
Aiguilles de calibre 25	Livingstone International	DN25GX1.0LV	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1,0 LV
Seringue de 1 ml	Livingstone International	T3SS01TA	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple : seringue Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/boîte. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Seringue de 10 ml	Livingstone International	T3SS10SA	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple, ici : seringue Terumo 10 ml Slip 100/boîte. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Tampons de gaze	Livingstone International	GSC075	N’importe quelle marque peut être utilisée et coupée à la taille requise. L’exemple ici est des cotons-tiges remplis de coton 7,5 x 7,5 cm, 8 plis. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Coussin chauffant	Ratek	WT1	N’importe quelle marque qui maintient la température à 37 ° C peut être utilisée. L’exemple ici est le plateau chauffant Ratek.
Éclairage opératoire	Appareil de Harvard	72-0215 avec 72-0267	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’appareil Harvard V-Lux 1000 Source de lumière froide avec guide de lumière à col de cygne bifurqué, noir, diamètre de fibre de 4,7 mm (chaque bras). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
Microscope chirurgical	Zeiss	Référence 495005-0014-000	N’importe quelle marque peut être utilisée. C’est le cas du stéréomicroscope Zeiss Stemi 2000-C avec support S, double spot et KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Suture en soie	Livingstone International	DTSK163019F4	N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple ici est * Envoyer cet article par e-mail à mon ami 3/8 Cercle Reverse Cut Suture en soie 3/0 Fil 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
Lames de scalpel	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 10020-00	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est la lame de scalpel FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Manche de scalpel	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 10004-13	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est le manche de scalpel FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x petits ciseaux chirurgicaux	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 14060-09	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est les ciseaux fins FST, 9 cm avec tranchant de 21 mm, tranchants, droits. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x pince avec pointe incurvée dentelée	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 11001-13	N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est une pince à motif standard FST 13 cm avec pointe incurvée de 2,8 x 1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x hémostats	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 13010-12	N’importe quelle marque peut être utilisée. Tous les opérateurs n’utilisent pas les hémostatiques. L’exemple ici est le FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats avec 20 mm de longueur x 1,3 mm de largeur, dentelé, pointe droite. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x porte-aiguille de suture	Outils scientifiques fins (FST)	Référence 12001-13	N’importe quelle marque peut être utilisée. Par exemple, il s’agit d’un porte-aiguille Hasley FST de 13 cm avec une pointe de 16 mm de longueur x 1,9 mm de largeur. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

_