Établissement d’un modèle murin de cancer du poumon pleural disséminé

Dans cet article

Résumé

Source : Yasui, H., et al. Photoimmunothérapie proche infrarouge pour des modèles murins de dissémination pleurale. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo démontre une méthode pour générer un modèle murin de dissémination pleurale en injectant une suspension de cellules cancéreuses du poumon dans la cavité thoracique d’une souris immunodéficiente.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Génération d’un modèle de dissémination pleurale

Préparez des cellules cibles exprimant la luciférase et suspendez 1,0 × 10⁶ cellules cibles dans 100 μL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS)
note: Les cellules cancéreuses intrathoraciques telles que le cancer du poumon et le MPM conviennent comme cellules cibles. Des cellules exprimant la luciférase ont été préparées par transfection du gène de la luciférase, et une expression élevée de la luciférase a été confirmée après > 10 passages cellulaires. Les cellules ont été cultivées dans un milieu supplémenté avec 10 % de pénicilline sérique fœtale bovine (100 UI/mL) et de streptomycine (100 mg/mL). Le nombre de cellules a été ajusté en fonction du taux de croissance tumorale et de l’évolution du traitement (1,0 × 10, 5-6,0 × 10,⁶ cellules/poids corporel).
Préparez des souris nues homozygotes athymiques femelles âgées de 8 à 12 semaines, d’un poids corporel préférable de 19 à 21 g.
Anesthésier les souris pendant l’intervention avec de l’isoflurane (introduction : 4-5 %, entretien 2-3 %) ; appuyer sur la queue avec une pince à épiler pour confirmer qu’il n’y a pas de réaction.
Fabriquez un bouchon avec de la mousse de polystyrène et fixez le bouchon à l’aiguille de 30 G de manière à ce que la pointe reste à 5 mm pour éviter les lésions pulmonaires. Pliez la pointe de l’aiguille à l’aide d’une pince propre ou en l’appuyant contre un objet dur nettoyé avec de l’EtOH à 70 % pour éviter le pneumothorax (Figure 1).
prudence: Attention à ne pas se percer. Utilisez une pince pour plier l’aiguille. Ne tenez pas le bouchon lorsque vous le fixez à l’aiguille. Il est plus sûr de coller le bouchon avant de remplir les cellules dans la seringue.
Remplissez une seringue (1 ml) avec les cellules cibles et fixez une aiguille 30G avec un bouchon.
Désinfectez la poitrine de l’animal avec 70 % d’EtOH avant la procédure.
Percez une aiguille dans la poitrine de la souris à travers l’espace intercostal. En raison de la résistance lors de la frappe contre les côtes à ce moment-là, la pointe de l’aiguille se déplaçait de haut en bas. Après avoir traversé l’espace intercostal, appuyez la seringue contre la souris et injectez 100 μL de cellules cibles (Figure 2).
note: La souris respire profondément lorsque l’aiguille pénètre correctement dans la cavité thoracique. En pliant la pointe de l’aiguille, le pneumothorax et l’injection inappropriée de cellules dans le poumon pourraient être évités.
note: La ponction de la paroi thoracique droite est recommandée pour éviter le risque de ponction de la paroi cardiaque.
Roulez la souris 2 à 3 fois pour répartir les cellules dans toute la cavité thoracique.
Remettez la souris dans une cage propre et chaude et surveillez jusqu’à ce qu’elle soit ambulatoire. Après la procédure, la souris se réveillera de l’anesthésie et se comportera normalement.

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Résultats

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Figure 1 : Dispositif facile à fabriquer à la main pour la transplantation de cellules. Fixez le bouchon en mousse de polystyrène à l’aiguille 30G de manière à ce que la pointe reste à 5 mm. La pointe de l’aiguille doit être pliée pour éviter le pneumothorax.

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