Coloration à la fluorescéine dans un modèle de rat auto-immun de sécheresse oculaire pour examiner les lésions cornéennes

Résumé

Source : Hou Ahiua, et al. A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase Effector Memory T Cells in Eyeglobe Tissue. J.Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo démontre la coloration de la cornée endommagée à l’aide d’un colorant à la fluorescéine pour évaluer l’étendue de la sécheresse oculaire auto-immune dans un modèle de rat. Les taches de fluorescence vertes des fibres de collagène colorées indiquent que l’épithélium cornéen est endommagé.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Évaluation des caractéristiques de la sécheresse oculaire

Mesurez les lésions cornéennes avec coloration à la fluorescéine.

1. Ajoutez 2 μL de fluorescéine à 0,2 % dans la cornée du rat. Ouvrez et fermez passivement les paupières du rat 3 fois avec un doigt ganté pour étaler le colorant fluorescéine à la surface de l’œil.
2. Après 1 min, prélevez 1 ml de solution saline avec une seringue de 3 ml (sans aiguille), placez la seringue à environ 2-3 mm en avant de la cornée et propulsez doucement la solution saline sur l’œil.
3. Acquérir des images sous le filtre bleu cobalt (c’est-à-dire ~400 nm) d’un microscope d’imagerie oculaire avec les lumières de fond éteintes.
   note: Les images ont ensuite été analysées par un système de notation modifié par rapport aux publications précédentes. Les images ont ensuite été analysées en classant subjectivement le nombre, la surface et l’intensité des taches vertes de 0 à 2, où 0 indique leur absence, 1 indique une coloration ponctuée de moins de 50 taches et 2 indique une coloration ponctuée de plus de 50 taches.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactif
Solution de fluorescéine sodique	Bausch & Lomb Royaume-Uni Limitée	Na
équipement
Stéréomicroscope avec éclairage annulaire et caméra	Carl Zeiss	Na