Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Encéphalomyélite auto-immune expérimentale ou modèle EAE
- Induction du modèle EAE
- Utiliser des souris femelles 129S4/SvJae×C57BL/6 âgées de 10 à 13 semaines pour l’induction de l’EAE.
- Administrer aux souris une injection sous-cutanée, dans le haut et le bas du dos, du peptide encéphalitogène MOG35 - 55 (glycoprotéine d’oligodendrocyte de myéline) (200 μg), émulsionné dans 200 μl d’adjuvant de Freund complet (CFA) contenant 400 μg de Mycobacterium tuberculosis.
note: En tant que témoin fictif négatif, non induisant la maladie, l'adjuvant de Freund incomplet contenant Mycobacterium tuberculosis, dans le même volume et par la même voie, peut être utilisé.
- Par la suite, et à nouveau 24 heures plus tard, administrez aux souris une injection intrapéritonéale de toxine coqueluche (au total 0,2 μg, diluée dans 200 μl de solution saline tamponnée au phosphate, PBS). Utilisez des souris non traitées comme groupe témoin, afin de pouvoir comparer les animaux malades avec les animaux sains.
note: Il est également possible d’induire l’EAE avec 200 à 300 μg de MOG35 à 55 peptide, 300 à 500 μg de Mycobacterium tuberculosis dans le CFA et 0,2 à 0,3 μg de toxine coqueluche dans un volume de 0,1 à 0,2 ml par injection.
- À partir d’une semaine après l’injection, examinez quotidiennement les souris pour détecter les symptômes cliniques (voir étape 1.2.1)
note: Le jour de l’apparition de la maladie varie selon les expériences, mais dans les conditions de notre laboratoire, il s’agit d’environ le 11e jour et donc, ici, le 14e jour est défini comme 3 jours après l’apparition de la maladie. Toutes les souris de la présente étude ont développé des symptômes cliniques.
2. Score des souris
- Classez les symptômes cliniques par scores cliniques comme suit : 0) aucun signe, 0,5) paralysie distale de la queue, 1) paralysie complète de la queue, 1,5) queue molle et faiblesse légère des pattes arrière, 2) queue molle et faiblesse sévère des pattes arrière, 2,5) queue molle et paralysie d’une patte arrière, 3) queue molle et paralysie des deux pattes arrière, 3.5) paralysie des deux membres postérieurs et faiblesse d’un membre antérieur (les souris atteignant ce score ont été euthanasiées, conformément aux directives éthiques locales).
