Dosage bactéricide sérique de l’activité bactéricide médiée par le complément d’anticorps

Abstract

Source : Weerts, H. P., et al. A High-throughput Bactericidal-specific Shigella-specific Evidence. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo présente une technique permettant d’évaluer l’activité bactéricide médiée par le complément des anticorps présents dans le sérum. Cette approche combine du sérum isolé avec des bactéries pathogènes et des protéines de complément exogènes. Lors de l’incubation, les bactéries sont cultivées sur une plaque de gélose et les colonies produites sont quantifiées pour mesurer le titre bactéricide sérique.

Protocol

1. Préparer le complément et cibler les bactéries

1. Préparer le complément de bébé lapin (BRC)
   REMARQUE : Les critères détaillés pour la sélection des lots de complément se trouvent ici : https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
   1. Obtenez du BRC congelé et décongelez-le à l’eau froide courante. Mélangez physiquement le BRC toutes les ~10-20 minutes jusqu’à ce qu’il soit complètement décongelé. Ne soumettez pas le BRC à des cycles répétés de gel-dégel.
   2. Pendant la décongélation du CRB, étiquetez les tubes à centrifuger de 1,5 ml, 5 ml ou 15 ml. Placez les tubes étiquetés sur de la glac....

Results

Figure 1 : Plaques LBA après le développement de la couleur. Les microcolonies bactériennes représentatives de S. flexneri 3a ont atteint pendant la nuit la taille appropriée. Une gélose de recouvrement a été ajoutée et les colonies ont développé une couleur rouge par réduction du composé TTC dans la gélose de recouvrement.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
gélatine	sigma	Référence G9391	Type B, poudre, BioReagent, adapté à la culture cellulaire
TTC (chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium)	sigma	Réf. T8877	≥98,0 % (HPLC)
Azoture de sodium (NaN3)	sigma	S2002	≥99,5 %
Complément Bébé Lapin	PelFreez	Référence 31061-3	3-4 semaines
HBSS avec Ca2+/Mg2+	Invitrogen	Référence 14065-56	Sans rouge phénol
LB Agar (Lennox)	sigma	N° L2897	Milieu de croissance microbienne en poudre
Bacto Agar	Bd	Référence 214010	Poudré, (C12H18O9)n
glycérol	sigma	Référence G5516	Pour la biologie moléculaire, ≥99 %
Bouillon LB (Lennox)	sigma	N° L3022	Milieu de croissance microbienne en poudre
Boîte de Pétri carrée	sigma	Z617679-240EA	120 mm x 120 mm
Plaque de dosage	Costar	Référence 3799	Plaque à fond en U à 96 puits avec couvercle
Logiciel NICE	Université de l’Alabama à Birmingham		ftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/