Essai d’adhésion in vitro pour détecter l’adhérence des cellules cancéreuses aux pièges extracellulaires des neutrophiles

Dans cet article

Résumé

Najmeh, S., et al. Isolation et manipulation simplifiées des pièges extracellulaires à neutrophiles humains. J. Vis. Exp. (2015)

Dans cette vidéo, nous faisons la démonstration d’un test utilisant la microscopie à fluorescence pour détecter l’adhésion des cellules cancéreuses aux pièges extracellulaires des neutrophiles (TNE). Dans les puits d’essai, il y a une augmentation notable du nombre de cellules cancéreuses marquées par fluorescence adhérant aux TNE, tandis que les puits traités avec de la DNase présentent une adhésion réduite des cellules cancéreuses aux TNE.

Protocole

1. Test d’adhésion statique des cellules cancéreuses NET-

Ajouter 100 μl de la pâte NET obtenue précédemment par puits dans une plaque à fond plat de 96 puits et laisser enrober les puits O/N à 4 °C dans l’obscurité.
Entre 12 et 20 heures plus tard, vérifiez la formation d’une monocouche uniforme de TNE acellulaires au fond des puits au microscope (Figure 1). À ce stade, aspirez doucement tout matériau non adhérent hors des puits, en veillant à ne pas perturber la monocouche NET au fond.
Ajouter 100 μl de solution bloquant l’albumine sérique bovine (BSA) à 1 % dans chaque puits et laisser agir 1 h à RT.....

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Résultats

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Graphique 1. Monocouche de filet. Les images de microscopie optique des puits de plaques de 96 puits recouverts de TNE montrent (A) une monocouche uniforme de TNE dans tout le puits, par opposition à (B) un revêtement inadéquat du puits avec une couche interrompue de TNE. Les barres d’échelle représentent 40 μm.