Procédure de coupe de la queue de souris pour le prélèvement de sang périphérique et l’isolement du plasma

Résumé

Source : Coats, J. S. et al., Expression de cytokines exogènes dans des xénogreffes dérivées de patients par injection avec une lignée cellulaire stromale transduite par cytokines. J. Vis. Exp. (2017)

Dans cette vidéo, nous montrons une procédure de coupe de queue dans un modèle murin pour collecter du sang périphérique. Le sang collecté est ensuite soumis à une centrifugation pour séparer le plasma, qui peut être utilisé pour d’autres expériences.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Prélèvement sanguin en série et surveillance plasmatique des cytokines humaines exogènes chez la souris

1. Prélèvement de sang par coupe de queue
   1. Désinfectez le capot de biosécurité et assemblez le dispositif de contention de la souris, les ciseaux et les autres outils/fournitures pour la procédure.
   2. Placez la souris dans une contention et fixez le tube pour minimiser les mouvements de la souris.
   3. Désinfectez la queue et les ciseaux chirurgicaux avec de l’alcool isopropylique. Appliquez une crème anesthésique topique sur la queue.
   4. À l'aide de ciseaux chirurgicaux très tranchants, coupez environ 0,5 à 1 mm du bout de la queue de la souris. Prélever environ 80 μL de sang périphérique à l’aide de tubes capillaires héparinisés.
      note: Si le sang doit être prélevé plus de six fois avec cette méthode, l’ablation de la queue doit être prudente en ce qui concerne la quantité de queue retirée. Au fur et à mesure que les cisailles progressent dans la queue, le diamètre augmente, les hémorragies sont plus rapides et la guérison prend plus de temps.

2. Séparation par plasma

1. Transférez le sang à l’aide d’une seringue à bulbe (pour l’expulser des tubes capillaires) dans un tube microconservateur K₂EDTA étiqueté ; retournez 20 fois pour empêcher la coagulation.
   note: En règle générale, la coagulation du sang à partir de la queue est rapide. Cependant, si l’hémorragie persiste plus de ~ 2 min, utilisez un crayon/poudre styptique pour faciliter la coagulation.
2. Centrifugez les tubes de prélèvement sanguin selon les instructions du fabricant et aliquote le plasma pour le stockage (-20 °C) jusqu'à ce qu'il soit prêt pour une analyse plus approfondie.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nano transpondeur implantable pour animaux avec canule	Trovan	ID-100B(1.25)
Crème anesthésique à la lidocaïne EMLA (obtenue par presciption dans un établissement de soins aux animaux)	Prescription	Prescription
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Seringue à insuline 28G1/2	Bd	#329461
Tubes BD Microtainer avec K2EDTA	Bd	#365974
centrifugeuse	Beckman Coulter	Alegra X-15R
Tubes capillaires FisherBrand (héparinisés)	Fisher Scientific	Tél. : 22-260-950
Hémocytomètre	pêcheur	Référence 02-671-6
Analyseur MACSQuant 10	Miltenyi Biotec	Tél. : 130-096-343
Cage à tarte souris	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
Souris Tail Illuminator Restrainer	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
Implanteur à poignée pistolet	Trovan	IM-300(1.25)
« Souris NSG » HOCHEMENT DE TÊTE. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, mâle ou femelle, 6 à 8 semaines	Souris JAX	# 005557