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Article de méthode
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8 juillet 2025
Source : Neuhaus, V. et al., Évaluation des effets cytotoxiques et immunomodulateurs des substances dans des tranches de poumon humain coupées avec précision. J. Vis. Exp. (2018)
Dans cette vidéo, nous décrivons une procédure permettant de gonfler des poumons humains isolés avec de l’agarose et de préparer des tranches de poumons humains découpées avec précision. Les coupes pulmonaires ex vivo préparées peuvent être utilisées pour d’autres expériences immunologiques.
Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.
1. Préparation générale des PCLS humains et exposition ultérieure aux produits chimiques
NOTE : Deux personnes sont nécessaires pour remplir un poumon. Il est recommandé de disposer d’un carnet de vaccination à jour contre les hépatites A et B. Les patients subissent régulièrement un dépistage du VHC et du VIH avant la transplantation pulmonaire. Si une infection active à Mycobacterium tuberculosis est diagnostiquée ou suspectée, le poumon d....
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tuyau en silicone 3,0 x 5,0 mm | A. Hartenstein (Leipzig, Allemagne) | SS04 | |
| seringue | Faust Lab Science (Klettgau, Allemagne) | 9.410 050 | |
| Outils de carottage | sur mesure | Sur mesure | |
| Poignée de lame de coupe (FEATHER) | pfm medical ag (Cologne, Allemagne) | 205530001 | |
| Lames de coupe (FEATHER) | pfm medical ag (Cologne, Allemagne) | Référence 2055500000 | |
| Microtome : Trancheuse de tissus | Alabama R&D (Bad Homburg, Allemagne) | 303400-ADPT | Trancheuse de tissus Krumdieck (MD6000) |
| Lame de microtome | Wilkinson Sword (Solingen, Allemagne) | ENR-4027800011506 | |
| Boîtes de culture tissulaire | Sigma (Munich, Allemagne) | Z666246-420EA | |
| Boucle d’inoculation | Copan Diagnostics (Murrieta, États-Unis) | CD176S01 | |
| TPP Plaques de culture tissulaire 24puits | Sigma (Munich, Allemagne) | Z707791-126EA | |
| cassette | Thermo Scientific (Schwerte, Allemagne) | 1000957 | |
| Nunc MaxiSorp à fond plat | Fisher Scientific GmbH (Hanovre, Allemagne) | Tél. : 44 2404-21 | |
| Nunc MicroWell 96-Well | Thermo Scientific (Schwerte, Allemagne) | 260836 | |
| Réactifs | |||
| Agarose, basse température de gélification | Sigma (Munich, Allemagne) | A9414-100G | |
| Mélanges et solutions de sels équilibrés, culture cellulaire, milieux et sels classiques, sels équilibrés d'Earle (EBSS) | Sigma (Munich, Allemagne) | E2888-500ML | |
| Pénicilline et streptomycine | Lonza (Verviers, Belgique) | 17-602E | |
| Jambon F-12 Modified Eagle’s Medium Nutrient Mixture (DMEM F-12) | Gibco (Darmstadt, Allemagne) | Référence 11039-047 | milieu de culture |
| Phosphate de Dulbecco avec Ca et Mg (DPBS) | Lonza (Verviers, Belgique) | BE17-513F |
