Un dosage de la résazurine à l’agar-gélose au charbon de bois pour évaluer l’activité d’un composé testé contre les mycobactéries

Résumé

Source : Gold, B. et al., Visualisation du dosage de la gélose au charbon de bois pour l’énumération semi-quantitative à débit moyen des mycobactéries. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo présente le dosage de la gélose au charbon de bois (CARA) pour évaluer l’activité des composés antimicrobiens contre Mycobacterium tuberculosis. Le CARA aide à évaluer l’efficacité de ces composés en mesurant leur impact sur la croissance bactérienne et en faisant la distinction entre les effets bactéricides et bactériostatiques.

Protocole

1. Configuration des tests MIC₉₀ répliquants et non réplicatifs

1. Inoculer M. tuberculosis, M. bovis BCG ou M. smegmatis à une DO₅₈₀ de 0,01-0,1 et étendre jusqu’à la phase mi-logarithmique (DO₅₈₀ ~ 0,5) dans Middlebrook 7H9-ADN (Middlebrook 7H9 contenant 0,2 % de glycérol, 0,2 % de dextrose, 0,5 % d’albumine et 0,085 % de NaCl) ou 7H9-OADC (Middlebrook 7H9 contenant 0,2 % de glycérol et 10 % de supplément d’OADC).
2. Cultiver M. tuberculosis et M. bovis BCG sous forme de cultures sur pied de ~20 ml dans des flacons de culture cellulaire et M. smegmatis<....

Résultats

Figure 1 : Schéma du test MIC₉₀ en bouillon et du CARA avec les résultats attendus. Les résultats du MIC₉₀ et du CARA sont présentés pour 8 activités possibles. Le code couleur pour les puits de microplaques MIC₉₀ est blanc (pas de croissance) et brun (croissance), et pour les microplaques CARA est noir (pas de fluorescence) et rose (fluorescen.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Middlebrook 7H9	Beckton Dickinson	Référence 271310
Middlebrook 7H11	Beckton Dickinson	Référence 298810
OADC de Middlebrook	Beckton Dickinson	212351
BSA, choc thermique	Roche	3118958001
charbon actif	sigma
PBS, Ca2+ et Mg2+ de Dulbecco gratuits	Technologies de la vie / Invitrogen	Référence 14190 à 144
Préadolescent 80	sigma	Réf. P8074
Rifampicin	sigma	Réf. R3501
6-bromo-1H-indazol-3-amine	Alfa Aesar	N° H34095
Phosphate de potassium monobasique	sigma	Réf. P0662
Sulfate de magnésium, heptahydraté	sigma	M1880
Citrate d’ammonium ferrique	sigma	Réf. F5879
Sulfate de zinc, heptahydraté	sigma	Référence Z0251
Chlorure d’ammonium	sigma	N° A9434
Acide butyrique, liquide	sigma	B103500
Poudre de résazurine	sigma	Réf. R7017
chlorure de sodium	J.T. Baker	Référence 4058-01
Solution de resazurin préparée	Invitrogen	DAL1100
spectrophotomètre	Dispositifs moléculaires	M5
Microplaques traitées pour culture tissulaire à 96 puits	Corning	Référence 3595
Réservoirs de réactifs	VWR	Référence 89094-678
Sacs en plastique refermables	VWR	Référence 395-94602
Tubes à fond rond en polypropylène de 14 mL	Corning	352059
Tube à centrifuger conique de 50 mL	Corning	Référence 352070
Fiole de culture cellulaire de 75 cm2	Corning	Réf. 431464U