Dosage sur plaque ponctuelle pour l’évaluation des réponses au stress oxydatif dans des souches bactériennes

Résumé

Source : Ketelboeter, L. M. et al., Méthodes pour inhiber la production bactérienne de pyomélanine et déterminer l’augmentation correspondante de la sensibilité au stress oxydatif. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo présente un test sur plaque ponctuelle conçu pour évaluer les réponses au stress oxydatif des souches bactériennes. Certaines souches produisent de la pyomélanine, un pigment antioxydant. À l’inverse, les souches traitées avec un agent d’essai, entraînant une réduction de la production de pyomélanine, présentent une sensibilité accrue au stress oxydatif, ce qui entraîne une diminution de la viabilité cellulaire par rapport aux souches productrices de pyomélanine.

Protocole

1. Préparation des milieux de culture, des antibiotiques et du 2-[2-nitro-4-(trifluorométhyl)benzoyl]-1,3-cyclohexanedione (NTBC)

1. Préparez le bouillon Luria-Bertani (LB) (1 % de tryptone, 0,5 % d’extrait de levure, 0,25 % de chlorure de sodium, NaCl dans H₂O) et aliquote dans les volumes appropriés. Stériliser par autoclave. Conserver à température ambiante.
2. Préparer 100 ml de gélose LB (1 % de tryptone, 0,5 % d’extrait de levure, 0,25 % de NaCl, 1,5 % de gélose en H₂O) dans des flacons de 250 ml. Stériliser en autoclave et conserver à température ambiante. Assurez-vous que la gélose est fondue avant de la v....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
2-[2-nitro-4-(trifluorométhyl)benzoyl]-1,3-cyclohexanedione (NTBC)	Sigma-Aldrich	SML0269 à 50 mg	Aussi appelé nitisinone. Soluble dans le DMSO.
H2O2	Sigma-Aldrich	Référence 216763-100ML	30 % en poids de H2O. Stabilisé.