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Article de méthode

Un test de cytométrie en flux pour identifier des sous-ensembles de cellules immunitaires dans des cellules mononucléées du sang périphérique

3.3K vues

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Torchia, M. L. G., et al. Discrimination de sept sous-ensembles de cellules immunitaires par cytométrie en flux à deux fluorochromes. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo présente une technique basée sur la cytométrie en flux utilisant deux fluorochromes pour identifier les lymphocytes T CD4+ et CD8+, les lymphocytes T γδ, les lymphocytes B, les cellules tueuses naturelles (NK) et les monocytes dans les cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC). Lors de l’incubation des cellules avec des anticorps conjugués au fluorochrome contre les marqueurs de surface, les sous-ensembles cellulaires sont identifiés à l’aide d’une stratégie optimale de cytométrie en flux.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

NOTE : Ce protocole a été testé sur des cellules sanguines périphériques isolées fraîches ou congelées et du sang total.

1. Coloration cellulaire

REMARQUE : Il est important de choisir des paires de fluorochromes avec pratiquement aucun chevauchement spectral pour réduire la dispersion des données en raison du fort débordement d’un fluorochrome dans l’autre détecteur de fluorochromes. Pour obtenir une iden....

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Résultats

figure-results-1
Figure 1 : Titrage représentatif des anticorps. (A) Le graphique à points montre l’expression de CD8 sur des PBMC frais colorés avec la concentration indiquée de l’anticorps. (B) Le tableau représente la médiane et l’écart-type de l’intensité fluorescente de la population CD8+, de l’intensité fluorescente médiane de la population CD8- et l’indice de coloration.......

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
CD3BD Biosciences562426Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_11152082
CD56BD Biosciences562751Anticorps pour la coloration
Numéro d’identification de la traduction : AB_2732054
TCRgdBD Biosciences331217Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_2562316
CD4BD Biosciences555347Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_395752
CD8BD Biosciences555367Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_395770
CD14BD Biosciences555398Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_395799
CD19BD Biosciences555413Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_395813
CD3BD Biosciences555335Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_398591
CD56BD Biosciences555518Anticorps pour la coloration
Numéro d’identification : AB_398601
TCRgdBD Biosciences331211Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_1089215
CCR7Biolégende353217Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_10913812
CD45RABD Biosciences560674Anticorps pour la coloration
Numéro d’identification : AB_1727497
CCR4BD Biosciences561034Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_10563066
CCR6BD Biosciences353419Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_11124539
CXCR3BD BiosciencesRéférence 561730Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_10894207
CD57BD Biosciences562488Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_2737625
HLA-DRBD Biosciences563083Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_2737994
CD16BD Biosciences563784Anticorps pour la coloration
Numéro de référence : AB_2744293
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