Article de méthode

Un test moléculaire pour quantifier les virus de la grippe A et B

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Otto, C. C. et al., Détection moléculaire rapide et différenciation des virus de la grippe A et B. J. Vis. Exp. (2017)

La vidéo montre un test de quantification des virus grippaux A et B. Ce test utilise l’amplification des endonucléases par entaille avec des amorces spécifiques à la grippe et la détection de cibles à l’aide de sondes de balise moléculaire

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Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

1. Avant d’exécuter le test

REMARQUE : Le test de grippe A et B est approuvé pour les échantillons d’écouvillonnage nasopharyngé et pour les écouvillons nasopharyngés stockés dans un milieu de transport viral. Des écouvillons sont inclus dans le kit et doivent être utilisés pour des performances optimales. Cependant, la rayonne, la mousse, les écouvillons floqués ou les écouvillons nasaux en polyester peuvent également être utilisés pour prélever des échantillons d’écouvillons nasaux.

  1. Pour prélever un échantillon d’écouvillon nasal, insérez l’écouvillon dans la narine qui a le drainage le plus visible ou qui est la plus encombrée. Avec une rotation douce, enfoncez l’écouvillon dans la narine jusqu’à ce qu’une résistance soit rencontrée, et tournez plusieurs fois contre la paroi nasale avant de le retirer lentement de la narine. Conservez les écouvillons et transportez-les dans des flacons contenant 3 ml de milieu de transport viral (VTM).
    REMARQUE : Il faut veiller à ce que les échantillons soient prélevés, car un prélèvement inadéquat peut donner des résultats erronés.
    REMARQUE : Les échantillons d’écouvillon doivent être analysés dès que possible après le prélèvement. Cependant, ils peuvent être conservés à température ambiante jusqu’à 2 heures ou réfrigérés à une température de 2 à 8 °C pendant une période maximale de 24 heures si les tests ne sont pas immédiatement disponibles. Les échantillons fraîchement collectés sont idéaux pour des performances d’essai optimales. Une manipulation, un stockage et/ou un transport inappropriés des échantillons peuvent donner des résultats erronés.
    REMARQUE : Par mesure de précaution, les personnes qui effectuent ce test doivent traiter tous les échantillons comme potentiellement infectieux en suivant les précautions universelles lors de la manipulation des échantillons.
  2. Amenez tous les échantillons à température ambiante avant de les tester.
    REMARQUE : Tous les composants de test sont à usage unique et ne doivent pas être utilisés pour effectuer plusieurs tests. Ne mélangez pas les composants du kit de différents numéros de lot. N’utilisez pas les réactifs du kit au-delà de leur date de péremption.
  3. Amenez le récepteur d’échantillon bleu à température ambiante avant de procéder au test. La base de test orange peut être testée sans qu’il soit nécessaire de la réchauffer à température ambiante.
  4. Laissez toutes les éprouvettes dans l’emballage en aluminium jusqu’à immédiatement avant l’utilisation. Allumez l’instrument en appuyant sur le bouton d’alimentation situé sur le côté de l’instrument. Entrez l'ID utilisateur et appuyez sur « OK ».

2. Exécution du test

  1. Pour commencer le processus de test, appuyez sur « Exécuter le test » sur l'écran de l'instrument. Entrez l'identifiant du patient à l'aide du clavier à l'écran ou du lecteur de codes-barres et appuyez sur « OK ». Ouvrez le couvercle et insérez la base de test Orange dans le support de base de test Orange.
  2. Vérifiez que le test correct s'affiche à l'écran et appuyez sur « OK ». Insérez le récepteur d'échantillon bleu dans le support de récepteur d'échantillon bleu.
    REMARQUE : N’ouvrez pas le récepteur d’échantillon avant de l’avoir placé dans l’instrument car cela empêcherait le tampon d’élution d’atteindre la température de fonctionnement correcte et pourrait affecter les performances du test.
  3. Attendez que le récepteur d’échantillon se réchauffe. Lorsque l’instrument vous le demande, retirez le sceau en aluminium et placez l’écouvillon du patient à tester dans le récepteur d’échantillons.
    REMARQUE : Lorsque vous retirez la feuille, placez deux doigts sur le bord du récepteur d’échantillons pour vous assurer qu’il reste en place.
  4. Mélangez vigoureusement l’écouvillon dans le liquide pendant 10 secondes, en appuyant la tête de l’écouvillon contre le côté du récepteur d’échantillon pendant que vous le mélangez pour aider à déloger l’échantillon de l’écouvillon. Appuyez sur « OK » pour continuer. Si les écouvillons de test sont stockés dans un milieu de transport viral, agitez le VTM pendant 10 secondes, puis ajoutez 200 μl au récepteur de l’échantillon.
  5. Appuyez sur la cartouche de transfert blanche dans le récepteur d’échantillon bleu. Continuez à appuyer sur le récepteur d’échantillon jusqu’à ce que le voyant orange augmente.
  6. Soulevez puis connectez la cartouche de transfert à la base de test. Observez l’indicateur orange descendre une fois que le transfert de cartouche est correctement fixé. Fermez le couvercle et ne l’ouvrez pas tant que le message « Test terminé » n’apparaît pas à l’écran.

3. Contrôle de la qualité (QC)

  1. Appuyez sur « Exécuter le test de contrôle qualité » sur l'écran d'accueil. Sélectionnez le test de contrôle qualité à exécuter. Confirmez que le type de test correspond à l'échantillon de CQ destiné au test en appuyant sur « OK » et en suivant les instructions à l'écran pour terminer le test.

4. Interprétation des résultats

  1. Une fois la série d’essais terminée, observez les résultats du test affichés à l’écran avec des interprétations pour la présence de la grippe A, B et de sous-types inconnus. Si les résultats ne sont pas valides, répétez le test.

5. Entretien et nettoyage

  1. Nettoyez quotidiennement l’instrument et la paillasse environnante avec une solution d’éthanol à 70 % ou d’eau de Javel à 10 %. Vaporisez la solution de nettoyage sur un chiffon humide et non pelucheux pour nettoyer. Ne versez pas les solutions directement sur l’instrument.

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Alere i InstrumentAlereNAT-000 (mondial), NAT-024 (États-Unis)
Kit de test Alere i Influenza A & B 24Alere425-000 (mondial), 425-024 (États-Unis)
Alere i Lecteur de codes-barresAlereEQ001001
Imprimante universelle AlereAlere55115 (Global), alereiprinter (États-Unis)
Pipette de précision de 200 μL
Pointes de pipette jetables de 200 μL
Milieu de transport viralRemelM4-RT

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Mots-clés

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