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Quantification par cytométrie en flux de cellules cancéreuses sénescentes induites par la thérapie

8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

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Source : Flor, A., et al. Sonde β-galactosidase associée à la sénescence fluorescente rouge lointain pour l’identification et l’enrichissement des cellules tumorales sénescentes par cytométrie en flux. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo illustre un test basé sur la cytométrie en flux pour quantifier les cellules cancéreuses sénescentes induites par le traitement avec des marqueurs de sénescence doubles. La détection et la quantification des cellules sénescentes impliquent l’utilisation d’un substrat de β-galactosidase. Le substrat est clivé par la β-galactosidase lysosomale active à l’intérieur des cellules sénescentes, produisant un produit fluorescent qui, en conjonction avec des granules de lipofuscine autofluorescents, marque les cellules cancéreuses sénescentes.

Protocole

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1. Induction de la sénescence par les médicaments de chimiothérapie dans des cellules cancéreuses en culture

REMARQUE : Toutes les étapes de manipulation cellulaire de cette section doivent être effectuées dans une enceinte de biosécurité en utilisant des pratiques stériles. Cette section est écrite pour les types de cellules adhérentes. Les cellules de suspension peuvent être utilisées avec les modifications appropriées, comme indiqué.

  1. Cultivez des lignées cellulaires cancéreuses selon le protocole standard du fournisseur ou du laboratoire qui a fourni la ou les lignées cellulaires spécifiques ....

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Bafilomycine A1Produits de recherche internationaleRéf. B40500
Sulfate de bléomycinecaïmanRéférence 13877
Albumine sérique bovine (BSA)Biologique des États-UnisA1380
Teinture de viabilité Calcein Violet 450 AMThermoFisher ScientificTél. : 65-0854-39eBiosciences
Anticorps DPP4, conjugué PEBiolégende137803Clone H194-112
Lignée cellulaire : Adénocarcinome pulmonaire humain A549Collection de la culture de type américainCCL-185
Lignée cellulaire : mélanome de souris B16-F10Collection de la culture de type américainCRL-6475
Racleur de cellulesCorning3008
Crépines de cellules, 100 μmFauconRéférence 352360
DDAO-GalactosideTechnologies de la vieD6488
DMEM moyen 1xTechnologies de la vieRéférence 11960-069
DmsosigmaD2438
ADN IsigmaDN25
Doxorubicine injectable de chlorhydrate (USP)PfizerNDC 0069-3032-20
Doxorubicine liposomale pégylée (USP)Solaire PharmaceutiqueNDC 47335-049-40
EDTA 0,5 MTechnologies de la vieRéférence 15575-038
ÉtoposidecaïmanRéférence 12092
FBSomégaFB-11
Réactif bloquant le récepteur FcBiolégendeRéférence 101320Anti-souris CD16/32
Cytomètre en flux (analyseur de cellules)Becton Dickinson (BD)diversLSRFortessa
Cytomètre en flux (trieur de cellules)Becton Dickinson (BD)diversFACSAria
GlutaMax 100xTechnologies de la vie35050061
HEPES 1 MLonzaBW17737
Liberase TLsigma5401020001Roche
Paraformaldéhyde 16 %Sciences de la microscopie électroniqueRéférence 15710
Pénicilline/Streptomycine 100xTechnologies de la vie15140122
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS) 1xCorningMT21031CVPBS de Dulbecco (sans calcium ni magnésium)
Particules de calibrage arc-en-ciel, kit ultraSpheroTechRéférence UCRP-38-2K3,5 à 3,9 μm, 2E6/mL
RPMI-1640 moyen 1xTechnologies de la vie11875 à 119
Chlorure de sodium 0,9 % (USP)Société de soins de santé BaxterRéférence 2B1324
Logiciel d’acquisition de données de cytomètre, « FACSDiva »Becton Dickinson (BD)n/aContacter BD pour la licence
Logiciel d’analyse de données de cytomètre, « FlowJo »Étoile de l’arbren/aContactez TreeStar pour obtenir une licence
Trypsine-EDTA 0,25 %Technologies de la vieRéférence 25200-114

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Mots-clés

S nescence induite par la th rapieB ta galactosidase associ e la s nescenceGranules de lipofuscineSubstrat DDAOGColorant de viabilit cellulaireTraitement la bafilomycine AMarquage au violet de calcineD tection par double marquage

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