Détection de la contamination bactérienne à l’aide de nanocapteurs magnétofluorescents

Résumé

Source : Shelby, T., Sulthana, S., McAfee, J., Banerjee, T., Santra, S. Dépistage des agents pathogènes d’origine alimentaire à l’aide d’un nanocapteur magnétofluorescent : détection rapide d’E. coli O157 :H7. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo présente une technique permettant de détecter les contaminants bactériens dans des échantillons d’aliments et d’eau à l’aide de nanocapteurs. Les bactéries pathogènes cibles sont détectées par une combinaison de relaxation magnétique et de modalités d’émission de fluorescence.

Protocole

1. Détection rapide d’E. coli O157 :H7 à l’aide de MFnS

1. Enrichissez diverses solutions de PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) avec des quantités croissantes de 10 à ⁶ bactéries mères, ce qui donne des plages d’UFC de 1 à 100. Ajoutez une quantité constante de MFnS (100 μL) à ces solutions.
2. Créez une solution de référence qui ne contient que du PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) et du MFnS (100 μL).
3. Incuber les solutions pendant 30 minutes à 37 °C, puis les laisser refroidir à température ambiante.
4. Transférez les solutions individuelles dans le relaxomètre magnétique (0,47 Tesla) et notez les variations des temps de relaxation (T2) par rapport aux UFC de chaque solution.
   1. Pour enregistrer les modifications des valeurs T2, commencez par mesurer la valeur T2 de la solution de référence qui contient uniquement PBS et MFnS.
      1. Placez la solution dans le relaxomètre magnétique. Ouvrez le logiciel correspondant, sélectionnez le paramètre « Relaxation T2 » et appuyez sur « mesurer ».
      2. Après la collecte de la T2 de base, mesurez les valeurs T2 des solutions supplémentaires qui ont été enrichies avec diverses concentrations de bactéries.
         note: La variation de T2 est équivalente à la T2 de référence soustraite de la T2 enrichie.
5. Retirer les échantillons du relaxomètre magnétique et centrifuger les tubes à 2880 x g pendant 10 min.
6. Décanter le surnageant et remettre en suspension les pastilles bactériennes dans 100 μL de PBS (1X, pH 7,4).
7. Ajouter 80 μL de chaque remise en suspension sur une plaque de 96 puits et enregistrer les intensités de fluorescence à 595 nm.
   note: Les tests peuvent être répétés à l’aide de différents solvants, y compris l’eau de lac, le lait et autres, comme décrit dans la section des résultats.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Chlorure ferreux tétrahydraté	Fisher Scientific	I90-500
Chlorure ferrique hexahydraté	Fisher Scientific	I88-500
Hydroxyde d’ammonium	Fisher Scientific	A669S-500
acide chlorhydrique	Fisher Scientific	A144S-500
Acide polyacryllique	Sigma-Aldrich	Référence 323667-100G
Edc	Thermofisher Scientific	Référence 22980
Nhs	Fisher Scientific	AC157270250
Anticorps anti-E. coli O111	Soins Sera	Référence 5310-0352
Anticorps anti-E. coli O157 :H7 [P3C6	Abcam	AB75244
Teinture DiI	Fisher Scientific	D282
Bouillon nutritif	Difco	Référence 233000
Granulés E. coli O157 :H7 lyophilisés	ATCC	700728
Relaxomteter magnétique	Bruker	MQ20
Zetasizer	Malvern	NANO-ZS90
Lecteur de plaques	Técan	Infini M200 PRO
Colonne magnétique	QuadroMACS	Tél. : 130-090-976
centrifugeuse	Eppendorf	Série 5804
Centrifugeuse (accuSpin Micro 17)	Fisher Scientific	Tél. : 13-100-676
Incubateur à secousses modèle de sol	LABORATOIRE SHEL	SSI5
Balance analytique	Metler Toledo	ME104E
Mélangeur Vortex Numérique	Fisher Scientific	Tél. : 02-215-370
Shaker à bascule en plein air	Fisher Scientific	Tél. : 02-217-765