Mesure de l’efficacité phagocytaire des macrophages avec la primaquine et la thérapie photodynamique

Résumé

La vidéo démontre l'évaluation de l'impact du traitement photodynamique sur l'efficacité phagocytaire des macrophages murins avec la primaquine. Traités, les macrophages infectés génèrent des espèces réactives de l’oxygène, entraînant une mort fongique sélective, évidente par une réduction des colonies sur la plaque.

Protocole

1. Préparation des cellules cryptococciques

1. Étaler l’organisme d’essai à l’aide d’une boucle d’inoculation sur une plaque de gélose stérile à base d’extrait de levure et de malt (YM).
2. Incuber la plaque de gélose à 30°C pendant 48 h.
3. À l’aide d’une boucle d’inoculation, prélevez 5 colonies simples et suspendez-les dans 5 mL d’eau distillée stérile.
4. Normaliser les cellules à l’aide d’un étalon McFarland pour obtenir une concentration cellulaire comprise entre 0,5 × 10⁵ et 2,5 × 10⁵ unités formant colonies (UFC) par mL de milieu RPMI-1640.
5. Versez une suspension cellulaire ....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
agar-agar	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Extrait de levure	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Extrait de malt	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Peptone	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
glucose	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Tache bleue trypan	Sigma-Aldrich		Pour dénombrer les cellules vivantes et mortes
Norme McFarland	Fisher Scientific		Pour standardiser les cellules
Primaquine	Merck		Utilisé comme photosensibilisant
Solution tampon de phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich		Laver et diluer les cellules
RPMI- 1640 moyen	Biochrom		Milieux de culture pour les macrophages
Sérum fœtal bovin (FBS)	Biochrom		Utilisé en complément du support RPMI-1640
Pénicilline/Streptomycine/L-glutamine	Sigma-Aldrich		Ajouté au support RPMI-1640
0,1 % Triton X-100	Sigma-Aldrich		Utilisé pour lyser les macrophages
Plaque de microtitration à fond plat de 96 puits	Greiner Bio-One		Utilisé comme récipient à l’intérieur duquel les réactions étaient transportées
Fiole en tissu	Lasec		Utilisé pour cultiver des macrophages
Tube à centrifuger de 50 mL	Lasec		Utilisé pour contenir des macrophages
Racleur de cellules	Lasec		Utilisé pour détacher les macrophages de la fiole tissulaire
Boucle d’inoculation	Lasec		Utilisé pour strier la culture sur la plaque de gélose
Hémocytomètre	Marienfield		Déterminer la concentration cellulaire des macrophages
Tubes en plastique de 1,5 mL	Merck		Utilisé comme récipient à l’intérieur duquel les réactions étaient transportées
UVL	ESCO		Utilisé pour l’activation du photosensibilisateur
Incubateur à CO2	ThermoFisher		Utilisé pour incuber les macrophages
Enceinte de sécurité biologique de classe II	ESCO		Travailler en toute sécurité avec les agents pathogènes sans nuire à l’utilisateur.