L’effet de l’aspirine et de l’ibuprofène sur la capacité phagocytaire des macrophages

Résumé

Cette vidéo présente une méthode permettant d’évaluer l’impact de l’aspirine et de l’ibuprofène, à leurs concentrations minimales inhibitrices, sur la phagocytose des macrophages à l’aide de cellules fongiques sensibles au pH fluorescent et colorées par un colorant. Les médicaments inhibent la cyclooxygénase-2, diminuant la formation de prostaglandines et stimulant la phagocytose des macrophages, comme observé par des mesures de fluorescence de colorants sensibles au pH.

Protocole

1. Considérations de sécurité

1. Le personnel doit porter un équipement de protection individuelle (EPI).
2. Manipulez l’agent pathogène et les macrophages dans une enceinte de sécurité biologique de classe II.

2. Préparation des macrophages

1. Cultiver une lignée cellulaire de macrophages murins, RAW 264.7, dans une fiole tissulaire contenant 10 mL de milieu Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640), complété par 20 mg/mL de streptomycine, 2 mM de L-glutamine, 20 U/mL de pénicilline et 10 % de sérum de bovin fœtal (FBS).
2. Placez le ballon dans un incubateur à....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
agar-agar	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Extrait de levure	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Extrait de malt	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Peptone	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Base d’azote de levure (YNB)	Laboratoires Difco		Utilisé dans la culture de cellules cryptococciques
glucose	Merck		Utilisé pour préparer les plaques YM
Tache bleue trypan	Sigma-Aldrich		Pour dénombrer les cellules vivantes et mortes
Solution tampon de phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich		Laver et diluer les cellules
RPMI- 1640 moyen	Biochrom		Milieux de culture pour les macrophages
Sérum fœtal bovin (FBS)	Biochrom		Utilisé en complément du support RPMI-1640
Pénicilline/Streptomycine/L-glutamine	Sigma-Aldrich		Ajouté au support RPMI-1640
Coloration pHrodo green zymosan A	Technologies de la vie		Utilisé pour colorer les cellules internalisées en raison d’un changement de pH
Acide acétylsalicylique (aspirine)	Sigma-Aldrich		Le médicament à tester
Éthanol absolu	Merk		Utilisé pour dissoudre l’aspirine
ibuprofène	Sigma-Aldrich		Médicament à tester
Diméthylsulfoxyde (DMSO)	Merk		Utilisé pour dissoudre l’ibuprofène
Plaques de microtitration à fond plat à 96 puits	Greiner Bio-One		Utilisé comme récipient à l’intérieur duquel les réactions étaient transportées
Fiole en tissu	Lasec		Utilisé pour cultiver des macrophages
Tube à centrifuger de 15 mL	Lasec		Utilisé pour contenir des macrophages
Racleur de cellules	Lasec		Utilisé pour détacher les macrophages de la fiole tissulaire
Boucle d’inoculation	Lasec		Utilisé pour strier la culture sur la plaque de gélose
Hémocytomètre	Marienfield		Déterminer la concentration cellulaire des macrophages
Tubes en plastique de 1,5 mL	Merck		Utilisé comme récipient à l’intérieur duquel les réactions étaient transportées
Spectrophotomètre de recherche EZ Read 800	Biochrom		Pour lire la densité optique
Fluoroskan Ascent FL	Thermo-Scientifique		Pour mesurer la fluorescence
Incubateur de CO2	Thermo-Fisher		Utilisé pour incuber les macrophages
Enceinte de sécurité biologique de classe II	ESCO		Travailler en toute sécurité avec les agents pathogènes sans nuire à l’utilisateur.