Tests pour l’évaluation qualitative et quantitative des concentrations de glucose dans l’urine de souris

Résumé

Cette vidéo montre une procédure de collecte d’urine de souris et d’évaluation de son taux de glucose. Pour évaluer le taux de glucose, plongez dans l’échantillon une bandelette de test recouverte d’enzymes et d’un colorant chromogène, en initiant un changement de couleur qui indique les niveaux de glucose. Pour quantifier les niveaux de glucose dans l’urine, introduisez un échantillon d’urine dans une plaque multipuits avec des concentrations de glucose croissantes, ajoutez le mélange réactionnel et incuberez. Mesurez l’absorbance pour créer une courbe standard et calculez les niveaux de glucose en fonction de l’absorbance de l’échantillon.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Test de glycémie dans l’urine

1. Placez un morceau de Parafilm propre sur une surface plane.
2. Prenez doucement une souris par la queue et posez-la sur le Parafilm.
3. Retenez la souris par la peau à l’aide du pouce et de l’index. Ramassez doucement la souris tout en la retenant au niveau de la peau, ce qui fait que la souris urine en réponse au stress. Laissez une goutte d’urine tomber sur la surface du parafilm. Remettez la souris dans sa cage après avoir recueilli la goutte d’urine.
4. Trempez l’extrémité réactive d’une bandelette Diastix dans la goutte d’urine fraîche recueillie à la surface du Parafilm. Retirez immédiatement la bande et posez-la à plat sur une surface, côté couleur vers le haut. Attendez au moins 30 secondes qu’une couleur se développe complètement sur la bande. Comparez la couleur développée avec le tableau de référence fourni sur le conteneur Diastix (Figure 1).
   Conseils: Si la souris n’urine pas sur le Parafilm, appliquez une légère pression sur le bas-ventre de la souris (autour de la vessie) à l’aide de l’index. Cette approche aidera à libérer des gouttes d’urine sur le parafilm. Pour les souris qui n'urinent pas après avoir suivi la procédure décrite ci-dessus, attendez 20 min et recommencez la procédure. S’assurer que toutes les procédures sont effectuées tout en respectant les directives de l’IACUC.

2. Collecte d’urine sur 24 h à l’aide d’une cage métabolique de souris

1. Assemblez une cage métabolique Tecniplast (Figure 2) selon les instructions du fabricant.
2. Remplissez l’ensemble d’alimentation avec de la nourriture en poudre, puis fixez l’ensemble d’alimentation à la languette métallique appropriée sur la chambre supérieure.
3. Fixez le support de bouteille d’eau sur la languette métallique restante sur la chambre supérieure.
4. Remplissez la bouteille d’eau vide, puis glissez-la dans le support de la bouteille, en vous assurant que le tube d’aspiration est dans le trou.
5. Mettez une souris dans la cage métabolique, puis couvrez-la avec un couvercle.
6. Assurez-vous que le couvercle de la cage est correctement installé.
7. Placez un tube de collecte d’urine et un tube de collecte de matières fécales aux endroits appropriés sur le sol de la chambre inférieure.
8. Après 24 heures, récupérez le tube de prélèvement d’urine et effectuez un dosage du glucose pour déterminer la concentration de glucose dans l’urine. Si le dosage du glucose n’est pas effectué le même jour, congelez l’échantillon d’urine dans le congélateur à -80°C.

3. Détermination de la concentration de glucose dans l’urine sur 24 heures

1. Si l’échantillon d’urine est conservé à -80 °C, laissez décongeler l’échantillon avant d’effectuer un test de glucose.
2. À partir d’un stock de 100 mg/dl, préparez huit étalons allant de 25 mg/dl à 0 mg/dl selon les instructions du kit de test.
3. Préparez les puits standard et les puits d’échantillons d’urine dans une plaque de 96 puits, le tout en double, conformément au manuel de la trousse.
4. Après avoir initié la réaction en ajoutant la quantité recommandée de mélange enzymatique dans tous les puits, couvrez la plaque et laissez-la incuber pendant 10 min à 37°C.
5. Absorbance de lecture à 500-520 nm à l’aide d’un lecteur de plaques.
6. Analysez les données selon les instructions du kit de test. Tracez l’absorbance de chaque étalon en fonction de la concentration de glucose et utilisez le graphique pour déterminer la concentration de glucose de l’échantillon d’urine de 24 heures.

Résultats

Graphique 1. Test de glycémie dans l’urine. Les gouttes d’urine de souris collectées sur Parafilm et le nuancier de référence fourni sur le contenant Diastix.

Graphique 2. Cage métabolique Tecniplast pour la collecte d’urine de so...