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Article de méthode

Technique de génération d’un modèle de souris xénogreffe humanisée greffée de PBMC humain

1.7K vues

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Li, Z., et al. Un modèle de xénogreffe humanisée de cellules mononucléées de sang périphérique humain (PBMC) pour la recherche translationnelle en immuno-oncologie (I-O). J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre un test permettant de générer un modèle murin de xénogreffe humanisé. Une souris immunodéprimée reçoit une injection de cyclophosphamide pour provoquer l’épuisement des cellules immunitaires. Des cellules tumorales dérivées de patients mélangées à des cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC) dans un hydrogel sont injectées par voie sous-cutanée dans la souris, formant une tumeur avec des lymphocytes T infiltrants.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut. Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Mise en place d’un modèle basé sur la PBMC humaine

  1. Myéloablation de souris NOD/SCID à l’aide de cyclophosphamide : détermination des doses optimales
    1. Achetez des souris femelles non obèses diabétiques/immunodéficience combinée sévère (NOD/SCID) (6-8 semaines).
      note:....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Séparation PBMC / culture cellulaire
Histopaque-1077sigmaRéférence 10771Isolement cellulaire
DMEMCorning10-013-CVRCulture cellulaire
LeCorning21-031-CVRCulture cellulaire
FBSCorning35-076-CVCulture cellulaire
Pénicilline-streptomycine, liquideGibcoRéférence 15140 à 163Culture cellulaire
Trypsine-EDTA (0,25 %), rouge de phénolGibcoRéférence 25200-114Culture cellulaire
MatrigelCorning356237Inoculation du CDX
Analyse FACS
Désoxyribonucléase I du pancréas bovinsigmaDN25Préparation des échantillons
Collagénase de type IsigmaC0130Préparation des échantillons
Anticorps anti-CD11b (M1/70) chez la souris et l’hommeBioLégende101206Facs
Anticorps anti-souris Ly-6C (HK1.4)BioLégende128008Facs
Anticorps anti-souris Ly-6G (1A8)BioLégende127614Facs
Anticorps anti-CD8 humain (OKT8)Sungene BiotechN° H10082-11HFacs
Anticorps anti-CD279 humain (MIH4)eBiosciencesTél. : 12-9969-42Facs
Anticorps anti-CD3 humains (HIT3a)4A Biotech--Facs
Cytomètre en flux de paillasse Guava easyCyte 8HTMilliporeRéférence 0500-4008Facs
Tumeur/implantation PDX / dosage / mesure
cyclophosphamideJ&KCat#419656, CAS#6055-19-2Efficacité in vivo
DisulfirameJ&KCat#591123, CAS#97-77-8Efficacité in vivo
seringueBd300841Inoculation du CDX
Aiguilles hypodermiques (14G)Shanghai SA Mediciall & Plastic Instruments Co., Ltd.0,7*32 TW SBInoculation PDX
Étrier Vernier (MarCal)Mahr16ERMesure de la tumeur
Cages individuelles ventilées IVCLingyunboji Ltd.IVC-128Animalerie

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