Un test in vitro pour évaluer l’activité antitumorale des cellules CAR-T spécifiques de la tumeur

Dans cet article

Résumé

Source : Kueberuwa, G., et al. Un modèle de lymphome à cellules B de souris syngénique pour l’évaluation préclinique des cellules CAR-T CD19. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo présente un test in vitro pour valider l’activité des lymphocytes T du récepteur antigénique chimérique (CAR). Les cellules de lymphome à cellules B exprimant l’antigène CD19 et la luciférase cytoplasmique sont co-cultivées avec des cellules CAR-T spécifiques de CD19. La liaison des CAR aux CD19 sur une tumeur induit les cellules CAR T à libérer des cytokines et des toxines qui provoquent la cytotoxicité des cellules tumorales. L’activité des cellules CAR-T est évaluée en quantifiant la cytokine libérée et la diminution de la bioluminescence médiée par la luciférase dans les cellules tumorales.

Protocole

1. Validation in vitro de l’activité des cellules CAR-T

Amorcez des cellules tumorales CD19+ cibles syngéniques avec ou sans expression de luciférase à une densité de 1 x 10⁴ cellules dans un milieu de cellules T complet (MTC)/puits de 100 μL dans une plaque de culture tissulaire à fond en U de 96 puits.
Ajouter 1 x 10⁴ cellules CAR-T CD19 dans un volume de 100 μL/puits pour obtenir un rapport effecteur/cible (E :T) de 1:1,
note: Des rapports E :T doivent être établis pour chaque construction CAR et lignée cellulaire cible.
Utilisez les lymphocytes ....

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Résultats

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Graphique 1. Validation de l’activité des cellules CAR-T. Des cellules CAR-T αmCD19 ont été co-cultivées avec des cellules de lymphome A20 modifiées pour exprimer la luciférase (1 x 10⁴:1 x 10⁴) pendant 16 h dans une plaque à 96 puits à fond en U. Après la co-culture, les cellules ont été granulées et le surnageant a été collecté. A) Les cellules ont été .......