Un test in vitro pour le dépistage d’interférons en tant que puissants inhibiteurs de la croissance du virus Zika

Dans cet article

Résumé

Source : Contreras, D. et al., Le système de culture cellulaire infectieuse du virus Zika et l’effet prophylactique in vitro des interférons. J. Vis. Exp. (2016)

La vidéo présente un test in vitro pour le dépistage d’interférons ayant une activité antivirale contre le virus Zika, un agent pathogène humain. Au sein de la cellule hôte, le virus Zika se multiplie lors de l’internalisation, infectant les cellules voisines et créant des zones distinctes ou des plaques virales. L’interféron de type I, agissant comme un agent antiviral, entrave la multiplication du virus, empêchant ainsi la formation de plaques virales dans la monocouche de la cellule hôte.

Protocole

1. Criblage d’une bibliothèque de cytokines contre l’infection par le virus Zika

Semez des cellules Vero naïves à raison de 1 x 10⁵ cellules par puits à l’aide d’une plaque de 12 puits. Une fois les cellules fixées (6 heures après l’ensemencement), ajoutez chaque cytokine à
Concentrations indiquées dans les duplicatas biologiques (volume de 2 ml/puits). Inclure le contrôle du véhicule (PBS) seul.
12 heures après le traitement, effectuer l’infection virale Zika (MOI de 0,1 dans 400 μl par puits). Inclure des puits de contrôle négatif sans infection (mock).
4 heures après l’infection, remplacer l’inoculum viral par un milieu traité aux cytokines (2 ml). Incuber les cellules à 37 °C pendant 44 heures supplémentaires.
48 heures après l’infection, comptez les plaques virales à l’aide d’un microscope à contraste de phase et obtenez des images représentatives des cellules infectées à un grossissement de 40X (Figure 1).

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Résultats

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Figure 1 : Les interférons démontrent une puissante activité virale anti-Zika. (A) Graphique montrant la modulation de la croissance virale du virus Zika par diverses cytokines par rapport à celle du contrôle du véhicule. Les valeurs moyennes et l’écart-type sont indiqués dans le graphique à barres. Les interférons ont montré une inhibition statistiquement sig...