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Génération de jonctions neuromusculaires à l’aide d’un dispositif microfluidique

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Source : Stoklund Dittlau, K. et al., Génération d’unités motrices humaines avec jonctions neuromusculaires fonctionnelles dans des dispositifs microfluidiques.J. Vis. Exp. (2021)

La vidéo démontre la formation des jonctions neuromusculaires à l’aide d’un dispositif microfluidique. Les cellules précurseurs neurales et les cellules progénitrices musculaires sont ensemencées dans différents puits à l’intérieur du dispositif et laissées mûrir en motoneurones et en myotubes, respectivement. La création d’un gradient volumique et chimique conduit au développement de jonctions neuromusculaires actives.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

Tous les réactifs et équipements utilisés dans ce protocole sont répertoriés dans la Table des matériaux et doivent être utilisés stériles. Le support doit être chauffé à température ambiante (RT) avant utilisation, sauf indication contraire. Pour un aperçu du protocole de co-culture, veuillez consulter la figure 1.

1. Différenciation des progéniteurs des motoneurones à partir de cellules souches pluripotentes induites (iPSC)

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

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Figure 1 : Vue d’ensemble schématique du protocole de l’unité motrice dans les dispositifs microfluidiques.Chronologie de la différenciation et aperçu de la co-culture du jour 0 au jour 28 selon la chronologie du protocole de différenciation des motoneurones. La différenciation des motoneurones à partir des iPSC est initiée au jour 0 et effectuée comme indiqué précédemment pendant les 10 jours.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
acide acétiqueCHEM-Lab NVRéférence : CL00.0116.1000Composant de revêtement. H226 et H314. P280
Agrin (protéine humaine recombinante)Systèmes de R&DRéférence 6624-AG-050Supplément médias
acide ascorbiquesigmaA4403Composant multimédia
βIII-tubuline (Tubuline)AbcamAB7751Anticorps (1:500)
β-mercaptoéthanolThermo Fisher Scientific31350010Composant multimédia. N° H317. P280.
B-27 sans vitamine AThermo Fisher ScientificRéférence 12587-010Composant multimédia
BDNF (facteur neurotrophique dérivé du cerveau)Peprotech450-02BFacteur de croissance
bFGF (facteur de croissance des fibroblastes humains basiques recombinants)Peprotech100 à 18 milliardsFacteur de croissance
Collagène de cuir de veauThermo Fisher Scientific17104019Composant de revêtement
CNTF (facteur neurotrophique ciliaire)Peprotech450-13BFacteur de croissance
DAPTTocris BioscienceRéférence 2634Supplément médias
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific11330032Composant multimédia
DmsosigmaD2650-100MLComposant de cryoconservation. H315, H319, H335. P280.
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS)Thermo Fisher Scientific14190250Sans calcium, sans magnésium
éthanolVWRRéférence 20.821.296stérilisation. N° H225. P280
Sérum fœtal bovinThermo Fisher Scientific10270106Composant multimédia
Milieu de montage par fluorescenceDakoS3023Composant immunocytochimie
GDNF (facteur neurotrophique dérivé de la lignée cellulaire gliale)Peprotech450-10BFacteur de croissance
Sérum de chevalThermo Fisher Scientific16050122Composant multimédia
IMDMThermo Fisher Scientific12440053Composant multimédia
Insuline transferrine séléniumThermo Fisher Scientific41400045Composant multimédia
Remplacement du sérum knockoutThermo Fisher ScientificRéférence 10828-028Composant de cryoconservation
Laminine de la membrane basale du sarcome murin d’Engelbreth-Holm-SwarmsigmaL2020-1MGComposant de revêtement et supplément de média
L-glutamineThermo Fisher ScientificRéférence 25030-024Composant multimédia
Supplément N-2Thermo Fisher ScientificRéférence 17502-048Composant multimédia
Milieu neurobasalThermo Fisher Scientific21103049Revêtement et composant média
Acides aminés non essentielsThermo Fisher Scientific11140050Composant multimédia
Parafilm MsigmaP7793-1EAStockage du matériel
Pénicilline/streptomycine (5000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15070063Composant multimédia
Boîte de Pétri (3 cm)Nunc153066Diamètre : 3 cm
Boîte de Pétri (10 cm)SarstedtRéférence 833.902Diamètre : 10 cm
Plaque (6 puits)Cellstar Greiner bio-oneRéférence 657160Plaque de culture
Poly-L-ornithine (PLO)sigmaP3655-100MGComposant de revêtement
Acide rétinoïquesigmaR2625Supplément pour les médias. H302, H315, H360FD, H410. P280.
Supplément cellulaire RevitaThermo Fisher ScientificA2644501Solution inhibitrice de ROCK
Agoniste lisséMerch MilliporeRéférence 566660Supplément médias
Pyruvate de sodiumTechnologies de la vieRéférence 11360-070Composant multimédia
Fiole T75sigmaCLS3276Plaque de culture
TrypLE expressThermo Fisher Scientific12605010Solution de dissociation MAB
Chlorhydrate de tubocyrarine pentahydratésigmaRéf. T2379-100GBloqueur des récepteurs de l’acétylcholine. N° H301. P280.
Dispositif microfluidique pré-assemblé XonaChipsMicrofluidique XonaXC150Longueur de la microrainure : 150 μm

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