Article de méthode

Construire des réseaux neuronaux tridimensionnels couplés à des réseaux de micro-électrodes

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Tedesco, M., et al., Interfaçage de cultures neuronales modifiées en 3D avec des réseaux de micro-électrodes : un modèle expérimental in vitro innovant. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo démontre le développement d’une culture neuronale 3D couplée à un réseau de microélectrodes planes avec des neurones de l’hippocampe. Les neurones isolés forment un réseau 2D sur la zone active du réseau de microélectrodes et adhèrent aux microbilles de verre dans une plaque multipuits avec un insert de membrane. Lors du transfert de ces microbilles enrobées de neurones dans l’électrode, elles s’organisent en un réseau neuronal 3D interconnecté.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

1. Dissection d’embryons et dissociation de tissus

  1. Hébergez des rats femelles adultes (200-250 g) à une température constante (22 ± 1 °C) et à une humidité relative (50 %) selon un horaire régulier clair-obscur (lumière de 7 h à 19 h) dans l’animalerie. Assurez-vous que la nourriture et l’eau sont librement disponibles.
  2. Anesthésier une rat femelle enceinte après 18 jours de développement (E18) à l’aide d’isoflurane à 3 %. Ensuite, sacrifiez l’animal par luxation cervical....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
LaminineSigma-AldrichL20200,05 μg/ml
Poly-D-lysineSigma-AldrichP64070,05 μg/ml
trypsineGibcoRéférence 25050-0140,125 % dilué 1:2 dans HBSS sans ions calcium et magnésium
DNAaseSigma-AldrichD50250,05 % dilué dans la solution de Hanks
NeurobasaleGibco Invitrogen21103049milieu de culture
B27Gibco Invitrogen175040442 % moyennement souple
Sérum fœtal bovin (FBS)Sigma-AldrichF-244210 %
Glutamax-IGibco350500380,5 million d’euros
gentamicineSigma-AldrichG.12725mg/litre
Poly-diméthyl-siloxane (PDMS)Corning Sigma481939L’agent de durcissement et le polymère
Réseaux de micro-électrodesSystèmes multicanaux (MCS)60MEA200/30-TI-prMEA avec : Grille d’électrodes 8x8 ; Espacement des électrodes et diamètre 200 et 30 μm, respectivement ; Anneau en plastique sans fil
MicrobillesDistrilab-Duke ScientificRéférence 90401gr Verre Part.Size Stds 40 μm
TranswellCostar SigmaCLS 3413Plaques multipuits avec insert membranaire (6,5 mm de diamètre, poreuse 0,4 μm)
HBSS sans ions calcium et magnésiumGibco InvitrogenRéférence 14175-052
Solution tampon HankssigmaN° H8264
ratSprague DawleyWistar Rat

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Mots-clés

R seau neuronal 3DR seau de micro lectrodesNeurones hippocampiquesMicrobilles de verreCulture neuronaleAdh sion cellulaireAuto assemblageStructure hexagonalePlaque multi puitsConditions d incubation

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