Génération de cellules neuronales à partir de cellules souches pluripotentes dérivées du sang

Résumé

Source : Becker-Kojić, Z. A., et al. Génération de cellules neuronales dérivées du sang. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo présente une technique permettant de générer des cellules neuronales à partir de cellules souches pluripotentes dérivées du sang (BD-PSCs). Les BD-PSCs sont obtenues en reprogrammant les cellules progénitrices du sang. Les BD-PSC indifférenciées sont cultivées sur des lamelles recouvertes de substrat de culture cellulaire à l’aide d’un milieu d’induction neurale et d’un milieu de différenciation neurale, déclenchant la différenciation en cellules avec un phénotype neuronal.

Protocole

Des approbations éthiques ont été obtenues lors de la réalisation des expériences.

1. Isolement des cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMNC)

1. S’assurer que tous les donneurs ont signé un consentement éclairé avant le prélèvement du sang, conformément aux directives de l’établissement.
2. Prélever 30 ml de sang de donneurs sains par du personnel médical formé selon le protocole standard.
3. Isoler les PBMNC par des milieux à gradient de densité. Utiliser 10 mL de milieu avec 25 mL de sang 1:1 dilué avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), et centrifuger à 300 x g

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Albumine fraction V	Roth	Réf. T8444.4
Kit de viabilité des cellules AO/PI	Biozym	872045	Biozym n’est plus fabriqué. Le produit fabriqué par Logos Biosystems.
Acide ascorbique 2-phosphate sequimagnes	Sigma Aldrich	A8960-5G
B27 Sans sérum 50x	Fisher Scientific (Gibco)	11530536
Solution FGF de base	Fisher Scientific (Gibco)	10647225
Biocoll	Merck Millipore	L6115-BC	Média à gradient de densité
BSA Frac V 7,5 %	Gibco	15260037
Microbilles CD45	Miltenyi	Tél. : 130-045-801	billes magnétiques de taille nanométrique
Lames de comptage cellulaire Luna	Biozym	Référence 872010	Biozym n’est plus fabriqué. Le produit fabriqué par Logos Biosystems.
D-MEM/F12	Merck Millipore	FG4815-BC
FBS	Merck Millipore	Réf. S0115/1030B	Abandonné. Disponible sous : TMS-013-B
GDNF recombinant humain	Fisher Scientific (Gibco)	10679963
GlutaMax 100x	Gibco	35050038	L-glutamine
Cellule d’héparine sodique	Sigma-Aldrich	H3149-50KU
BDNF humain	Fisher Scientific (Gibco)	11588836
Iscove (IMDM)	Biochrom	FG0465
Souris laminine	Fisher Scientific (Gibco)	10267092
Compteur de cellules automatisé Luna FL	Biozym	Référence 872040	Biozym n’est plus fabriqué. Le produit fabriqué par Logos Biosystems.
Tampon MACS	Miltenyi	Tél. : 130-091-221
MEM NEAA 100x	Gibco	11140035
MiniMACS Trennsäulen	Miltenyi	Référence : 130-042-201
Multiplatte Nunclon 4 puits	Fisher Scientific	10507591
Supplément N2 100x	Fisher Scientific (Gibco)	11520536
Milieu neurobasal	Gibco	10888022
PBS stérile	Roth	Référence 9143.2
Poly-L-ornithine	Sigma-Aldrich	P4957-50ML