Croissance et différenciation de neurones chargés de nanoparticules magnétiques sur des plateformes magnétiques

Résumé

Source : Indech, G., et al. Fabrication de plateformes magnétiques pour l’organisation à l’échelle micrométrique de neurones interconnectés. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo démontre l’absorption de nanoparticules magnétiques fluorescentes (MNP) par les cellules neuronales via l’endocytose. La croissance de ces neurones chargés de MNP sur le substrat à motifs magnétiques permet la fixation des cellules. L’ajout d’un facteur de croissance contenant un milieu aide à la croissance des extensions neuronales, tandis que le champ magnétique du substrat dirige l’orientation de l’extension.

Protocole

1. Absorption des nanoparticules magnétiques cellulaires (MNP)

1. Préparez le milieu de croissance de base pour la culture cellulaire PC12 en ajoutant 10 % de sérum de cheval (HS), 5 % de sérum de veau fœtal (FBS), 1 % de L-glutamine, 1 % de pénicilline/streptomycine et 0,2 % d’amphotéricine dans le milieu du Roswell Park Medical Institute (RPMI), et filtrez à l’aide d’un filtre en nylon de 0,22 μm.
2. Ajouter 1 % de sérum de cheval (HS), 1 % de L-glutamine, 1 % de pénicilline/streptomycine et 0,2 % d’amphotéricine dans un milieu RPMI pour préparer le milieu de différenciation PC12 et filtrer à l’aide d’un filtre en nylon de 0,22 μm.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Plaque de culture cellulaire à 6 puits	Faucon	353846
Plaque de culture cellulaire à 96 puits	SPL sciences de la vie	Référence 30096
Solution d’amphotéricine B	Industries biologiques	Référence 03-028-1B
Albumine sérique bovine (BSA)	Industries biologiques	Référence 03-010-1B
Fiole de culture cellulaire et tissulaire	Biofil	TCF002250	75,0 cm^2 250 mL Capuchon d’aération, non traité
Boîte de culture cellulaire	Greiner Bio-One	627 à 160	35 millimètre
Tube à centrifuger	Biofil	CFT021500	50 ml
Collagène de type I	Corning Inc.	354236	Queue de rat, plage de concentration 3-4 mg/mL
Aiguille jetable	KDL		23 grammes
Seringue jetable	Medispo	1160227640	10 ml
Sérum de cheval donneur	Industries biologiques	Référence 04-124-1A
Éthanol 70 %	ROMICAL LTD	Référence 19-009102-80
Éthanol absolu (déshydraté)	Biolab-produits chimiques	Référence 52505
Sérum fœtal bovin (FBS)	Industries biologiques	Référence 04-127-1A
Souris fraîche β-NGF	Peprotech	450-34
Électroaimant GMW C-frame .	Buckley systems LTD		3470, 45 mm
L-glutamine	Industries biologiques	Référence 03-020-1B
PBS 10x	Hylabs	BP507/1LD
Lignée cellulaire PC12	ATCC	CRL-1721
Solution de pénicilline-streptomycine nystatine	Industries biologiques	Référence 03-032-1B
RPMI 1640 avec l-glutamine	Industries biologiques	Référence 01-100-1A