Article de méthode

Différenciation des cellules progénitrices neurales induites en astrocytes

8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

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Source : Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Dérivation de fibroblastes humains adultes et leur conversion directe en cellules progénitrices neurales expansibles. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo montre le processus de différenciation des cellules progénitrices neurales induites (iNPCs) en neurones et astrocytes à l’aide de milieux spécialisés.

Protocole

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1. Différenciation des iNPC

  1. Différenciation vers la lignée neuronale
    1. Cellules de culture sur des plaques recouvertes de laminine comme décrit ci-dessus. Changer de milieu en milieu neuro-difficile (DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300 ng/ml d’AMPc, 200 μM de vitamine C, 10 ng/ml de BDNF, 10 ng/ml de GDNF) lorsque les cellules sont confluentes à environ 70 %. Changez de support tous les deux jours pendant trois semaines. Ne divisez pas les cellules pendant la différenciation.
    2. Après trois semaines, les cellules devraient exprimer le marqueur neuronal TUJ1. Pour obtenir des neurones plus matures et des sous-types neuronaux, continuez la différenciation jusqu’à 3 mois.
  2. Différenciation vers la lignée gliale
    1. Changer les milieux en milieux d’induction gliale (1:1 DMEM/F-12 : Neurobasal, 1x N2, 1x B27, 10 μM β-mercaptoéthanol, 100 μM d’acides aminés non essentiels, 1,5 mM de L-Glutamine, 5 μg/ml d’insuline, 40 ng/ml de T3) incluant 20 ng/ml d’EGF pour induire la différenciation en cellules précurseurs gliales. Retirez la moitié du support et remplacez-le par un support frais tous les deux jours pendant environ 2 semaines. Pendant cette période, les cellules doivent être divisées 1:3 en présence de 10 μM d’inhibiteur de ROCK Y27632 lorsque la confluence de 100 % est atteinte.
    2. Après 2 semaines, différenciez davantage les cellules en astrocytes : lorsque les cellules sont presque confluentes, changez de milieu pour des milieux astrocytaires disponibles dans le commerce, changez de milieu tous les deux jours. Après environ 7 jours, les cellules commencent à exprimer des marqueurs astrocytaires (par exemple, GFAP). Si les cellules deviennent 100 % confluentes pendant le protocole de différenciation, divisez-les dans un rapport de 1:2 en présence de 10 μM d’inhibiteur de ROCK Y27632.

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Milieux astrocytairesScienCell1801
B27Technologies de la vieRéférence 17504-044
Le BDNFPeprotechRéférence 450-02
campsigmaA6885
DMEMTechnologies de la vieRéférence 41966-029
DMEM F12Technologies de la vieRéférence 11320-033
DmsoRoth4720
LeTechnologies de la vieRéférence 14190-094
FEMTechnologies de la viePHG0313
FcsBiochrom AGRéférence 50115
GDNFPeprotech450-10
insulineSeralabGEM-700-112-P
L-GlutamineTechnologies de la vieRéférence 25030-024
LamininesigmaL2020
N2Technologies de la vieRéférence 17502-048
NeurobasaleTechnologies de la vieRéférence 21103-049
Acides aminés non essentielsTechnologies de la vieRéférence 11140-050
vitamine CsigmaA4544
β-MercaptoéthanolTechnologies de la vie21985023

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Mots-clés

Diff renciation des astrocytesmilieu d induction glialemarqueur neuronal TuJ1inhibiteur de la Rho kinasefacteur de croissance pidermiquerev tement de matrice extracellulaireprotocole de renouvellement du milieuprolif ration cellulairecellules pr curseurs gliales

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