Différenciation des cellules souches embryonnaires humaines en oligodendrocytes

Résumé

Source : Assetta, B., et al. Génération de neurones humains et d’oligodendrocytes à partir de cellules souches pluripotentes pour la modélisation des interactions neurones-oligodendrocytes. J. Vis. Exp (2020).

Cette vidéo montre le processus de génération de cellules précurseurs d’oligodendrocytes (OPC) à partir de cellules souches embryonnaires humaines, suivi de la maturation des OPC en oligodendrocytes. Ce processus de génération d'oligodendrocytes ouvre de nombreuses pistes pour améliorer la recherche et le traitement des maladies neurodégénératives, dont la maladie d'Alzheimer.

Protocole

1. Induction de cellules précurseurs d’oligodendrocytes (OPC) humaines à partir de cellules souches pluripotentes et maturation des oligodendrocytes

1. Génération de cellules progénitrices neurales (NPC) : protocole monocouche (~7 jours). Voir la figure 1A pour le diagramme.
   1. Utiliser des cellules ES humaines H1 disponibles dans le commerce au passage de 52 (voir le tableau des matériaux). Cultivez les cellules sur des plaques à 6 puits recouvertes d’une solution de matrice extracellulaire (~0,5 mg de solution matricielle par plaque à 6 puits ; voir le tableau des matériaux) à l’aide d’un milieu de....

Résultats

Figure 1 : Génération d’iOPC (cellules précurseurs d’oligodendrocytes induits) et maturation d’iOL (oligodendrocytes induits). (A) Organigramme de la production d’iOPC et d’iOL. (B) Images représentatives en fond clair et en immunofluorescence des iOPC au jour 15. Olig2 (marqueur pan-oligodendroglia) est représenté en vert, O4 (marqueur OPC) en rouge et DAPI e.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Accutase	Technologies STEMCELL	Référence 7920
Supplément B27	ThermoFisher	17504044
bFGF	ThermoFisher	PHG 0266
camp	MilliporeSigma	A9501
Clémastine	MilliporeSigma	SML0445
DMEM/F12 moyen	Technologies STEMCELL	Référence 36254
Dmso	ThermoFisher	D12345
Sérum fœtal bovin	ScienCell	10
H1 cellules ES humaines	WiCell	WA01
Matrigel	Corning	354234
mTeSR plus	Technologies STEMCELL	Référence 5825
Supplément N2	ThermoFisher	17502001
Neurobasale A moyenne	ThermoFisher	Référence 10888-022
Acides aminés non essentiels	ThermoFisher	Référence 11140-050
PDGF-AA	Systèmes de R&D	Référence 221-AA-010
pMDLg/pRRE	Addgene	Référence 12251
Polybrène	MilliporeSigma	TR-1003-G
pRSV-REV	Addgene	Référence 12253
Inhibiteur de ROCK Y-27632	Technologies STEMCELL	Référence 72302
fléchir	Tocris	N° 4366
STEMdiff Neural Progenitor Freezing Media	Technologies STEMCELL	Référence 5838
Kit d’induction neuronale STEMdiff SMADi	Technologies STEMCELL	Référence 8581
T3 triiodothyronine	MilliporeSigma	Réf. T6397
Tempo-iOlogo : OPCs humains dérivés d’iPSC	Tempo BioScience	Réf.102
TetO-NG2-Puro	Addgene	Référence 52047
VSV-G	Addgene	Référence 12259