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Article de méthode

Culture et maintien de neurones dopaminergiques à partir de tissu cérébral embryonnaire de souris

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Weinert, M. et al., Isolement, culture et maintien à long terme de neurones dopaminergiques mésencéphaliques primaires à partir de cerveaux de rongeurs embryonnaires. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo décrit une méthode de culture de neurones dopaminergiques à partir de tissu cérébral embryonnaire de souris. Le processus comprend le traitement du mésencéphale avec une enzyme protéolytique, le détachement des cellules et leur culture sur des lamelles enrobées de polymère dans un milieu riche en nutriments avec des antibiotiques pour leur croissance et leur viabilité à long terme.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Dissociation des cellules du mésencéphale ventral

  1. Transférez les morceaux du mésencéphale ventral sous une hotte à flux laminaire. Retirer la solution saline équilibrée de Hanks (HBSS) et ajouter 1 ml d'acide trypsine-éthylènediaminetétraacétique à 0,05 % préchauffé (37 ºC) (trypsine-EDTA) dans le tube conique (volumes suffisants pour un maximum de 12 morceaux de mésencéphale ventral). Incuber le tissu à 37 ºC pendant 5 à 10 min.
  2. ....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Mélange de nutriments moyen Eagle modifié de Dulbecco F-12InvitrogenRéférence 11330
Solution saline équilibrée de Hanks (HBSS) (1X), liquideInvitrogenRéférence 24020-117
Sérum fœtal de bovin, inactivé par la chaleur (FBS)InvitrogenRéférence 16140
Supplément N2 (100X), liquideInvitrogenRéférence 17502-048
Solution de D-(+)-glucose (45 % (poids/vol) dans l’eausigmaRéférence G8769
Albumine sérique bovine BSA sigmaA9430
Laminine de la membrane basale du sarcome murin Engelbreth-HolmSwarm sigmaL2020
Pénicilline/streptomycineInvitrogenRéférence 15070
Trypsine (0,05 % (poids/vol)InvitrogenRéférence 25300
Culture cellulaire d’albumine sérique bovine (BSA) testéesigmaA9418
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)sigmaRéf. P3813
Poly-L-ornithine, solution à 0,01 %sigmaRéf. P4957
Solution de bleu de trypan (0,4 % (poids/vol))Biowhittaker17-942E

Mots-clés

Traitement la trypsine EDTAdissociation cellulairelamelles rev tues de polym remilieu completchangement de milieumaintenance long termeconnexions synaptiquesviabilit cellulaire