Isolement et culture de progéniteurs de neurones granulaires cérébelleux murins

Résumé

Source : Bovio, P., et al., Isolement et culture de progéniteurs neuraux suivis d’une immunoprécipitation de la chromatine de l’histone 3 Lysine 79 marque de diméthylation. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre l'isolement et la culture de cellules progénitrices neurales cérébelleuses à partir du cervelet d'un petit souris. Les progéniteurs des neurones granulaires cérébelleux sont isolés et purifiés par adhésion différentielle, éliminant efficacement les astrocytes. Ces progéniteurs cultivés se différencient ensuite en neurones granulaires cérébelleux.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

1. Préparatifs

1. Préparations pour l’isolement du CGNP (progéniteur du neurone granulaire cérébelleux)
   1. Organiser un accouplement approprié des souris pour générer des animaux P5-P7 afin d’isoler le cervelet (3-5 animaux par ChIP et condition).
   2. Préparez HBSS/Glucose en ajoutant 6 mg/mL de glucose dans le tampon HBSS.
   3. Préparez le milieu de culture cellulaire CGNP (CGM) en ajoutant 1 % (v/v) de supplément de N2, 1 % (v....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Supplément B27 (50x)	Technologies de la vie	17504044	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CCM
DMEM-F12	Technologies de la vie	Référence 11320-033	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CGM
Sérum fœtal bovin 10 % (v/v)	Gibco	10082147	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’isolement CPC et la CGM
glucose	Sigma-Aldrich	Référence G5767	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’isolement du CGNP
Glutathion (1,25 mg/ml)	Sigma-Aldrich	Référence G4251	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CCM
glycine	Carl Roth	Référence 3187	Catégorie : ChIP Abréviation/Commentaire : Pour la fixation cellulaire
La solution saline équilibrée de Hank	Technologies de la vie	Référence 14025-100	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : HBSS
L-glutamine (200 mM)	Technologies de la vie	25030081	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CCM
Laminine	Sigma-Aldrich	L2020	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’élevage de CPC
Supplément N2	Technologies de la vie	17502048	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CGM
Milieu neurobasal	Gibco	21103049	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CCM
Pénicilline-streptomycine-néomycine 1 % (v/v)	Technologies de la vie	15640055	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : PSN, pour CCM et CGM
Solution saline tamponnée au phosphate	Technologies de la vie	10010023	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : PBS, pour l’isolement CPC
Poly-D-lysine	Sigma-Aldrich	P6407	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’isolement du CGNP
Bromhydrate de poly-L-ornithine	Sigma Aldrich	Réf. P3655	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’élevage de CPC
chlorure de potassium	Thermo Fisher	AM9640G	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : KCl, pour CGM
Hérisson sonique (SHH)	Sigma-Aldrich	SRP6004	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’isolement du CGNP
Superoxyde dismutase (1mg/ml)	Sigma-Aldrich	S7571	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour CCM
Trypsine-EDTA 0,05 % (p/v)	Sigma Aldrich	Référence 59417C	Catégorie : Culture cellulaire Abréviation/Commentaire : Pour l’isolement du CPC