Un test de myélinisation induite par transduction in vitro pour des cellules précurseurs d’oligodendrocytes

Dans cet article

Résumé

Source : Peckham, H. M., et al. Production et utilisation de lentivirus pour transduire sélectivement des cellules précurseurs primaires d’oligodendrocytes pour des essais de myélinisation in vitro. J. Vis. Exp. (2015).

La vidéo démontre un protocole permettant de différencier les cellules précurseurs d’oligodendrocytes (OPC) en oligodendrocytes et d’induire la myélinisation dans une co-culture avec des neurones du ganglion de la racine dorsale (DRG). Les OPC sont transduits avec des vecteurs lentiviraux codant pour une protéine de signalisation qui régule la myélinisation. Les OPC transduits sont co-cultivés avec des neurones DRG pour évaluer la différenciation en oligodendrocytes et la myélinisation induite par la protéine de signalisation.

Protocole

1. Clonage du lentivecteur 2K7

Avant de cloner le gène d’intérêt dans le vecteur lentiviral 2K7, sous-clonez le gène dans le vecteur pENTR (3637 pb, résistant à la kanamycine) à l’aide de techniques moléculaires standard. Utilisez les sites de restriction EcoRI et SacII pour le sous-clonage.
Amplification du lentivecteur 2K7
1. Transformez l’ADN du lentivecteur 2K7 en mélangeant doucement 100 ng d’ADN plasmidique avec des cellules compétentes, et incubez sur glace pendant 30 min.
2. L’ADN de choc thermique/les cellules compétentes se mélangent à 42 °C pendant 90 secondes et les plaquent sur des plaques LB-Agar co....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Table 1. Tableau des solutions mères.

nom	ingrédients	Notes
Tampon TE pH 8	10 mM Tris pH 8 1 mM d’EDTA pH 8	Compléter à l’eau déminéralisée.
Polyéthylénimine (Î.-P.-É.)	1 g/L	Remplir dans de l’eau déminéralisée, filtrer-stériliser et conserver.......