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Procédé de génération d’un milieu conditionné par des oligodendrocytes

July 8th, 2025

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Abstract

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Source : Mazuir, E., et al. Génération d’oligodendrocytes et milieu conditionné par des oligodendrocytes pour des expériences de co-culture. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo démontre la production de milieux conditionnés par les oligodendrocytes (OCM) à partir de cellules de la lignée des oligodendrocytes en les stressant pour améliorer leur libération moléculaire dans le milieu. Ce milieu, riche en facteurs de croissance, en cytokines et en autres molécules bioactives, peut être ajouté à des cultures de neurones pour mieux comprendre l’impact des facteurs sécrétés par les oligodendrocytes sur la physiologie et la connectivité neuronales.

Protocol

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1. Récolte et culture de cellules de lignée OL (OL)

REMARQUE : Ces étapes doivent être effectuées dans une hotte à flux laminaire dans des conditions stériles.

  1. Le lendemain de l’agitation, préparez le milieu Bottenstein-Sato (BS) selon le tableau 1.
  2. Rincez 3 fois les boîtes de Pétri enrobées avec de l’eau distillée stérile.
  3. Récoltez le surnageant des flacons contenant principalement des cellules de la lignée OL mais aussi quelques cellules microgliales et placez-le sur des boîtes de Pétri non enrobées de 100 mm.
    note: ....

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Disclosures

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Supplément B27ThermoFisher17504044
Solution de D-(+)-glucosesigmaRéférence G8769
Aigle modifié de Dulbecco MediumThermoFisher31966021
Éthanol 100 %sigmaRéférence 32221-M
Éthanol 70 %Produits chimiques VWRRéférence 83801.36
Sérum de veau fœtalThermoFisher10082147
NeurobasaleThermoFisher21103049
Pénicilline-streptomycineThermoFisher15140122
Saline tamponnée au phosphate sans calcium ni magnésiumThermoFisherA1285601
Polyéthylénimine (PEI)sigmaRéf. P3143
Médias Bottenstein-Sato (BS)
apo-Transferrin humainsigmaRéf. T1147
BSA (albumine sérique bovine)sigmaA4161
Aigle modifié de Dulbecco MediumThermoFisher31966021
insulinesigmaI5500
PDGFPeprotechAF-100-13A
Pénicilline-streptomycineThermoFisher15140122
progestéronesigmaRéf. P8783
Chlorhydrate de putrescinesigmaP5780
Sélénite de sodiumsigmaS5261
T3 (sel sodique de 3,3',5-Triiodo-L-thyronine)sigmaRéf. T6397
T4 (L-thyroxine)sigmaRéf. T1775
outils
Filtre 0,22 μmSartoriusRéférence : 514-7010
Seringue de 1 mLTerumo1611127
Boîte de Pétri de 100 mmDutscherRéférence 193100
Tube de 15 mLCorning Sciences de la vie734-1867
Tube de 50 mLCorning Sciences de la vieN° 734-1869
Boîte de Pétri de 60 mmDutscherRéférence 67003

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Oligodendrocyte Conditioned MediumOligodendrocyte Lineage CellsCell Attachment EnhancementNutrient Poor Medium IncubationMedium Filtration SterilizationBioactive Molecule SecretionOCM Storage PreservationPolymer Coated Petri DishHumidified Incubator ConditionsLaminar Flow Hood Sterility

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