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Article de méthode

Une technique pour générer des organoïdes cérébraux à partir de cellules souches embryonnaires humaines

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Boisvert, E. M., et al. A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells. J. Vis. Exp (2020).

Cette vidéo présente une technique de génération d’organoïdes cérébraux à partir de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh). La culture adhérente des colonies de CSEh est traitée avec des enzymes pour les détacher et les briser en grappes. Ces amas forment des sphères tridimensionnelles en suspension, qui sont ensuite amenées à se différencier en organoïdes qui imitent le cortex cérébral avec des couches de neurones et de cellules gliales.

Protocole

1. Maintenance des cellules souches

  1. Maintenir les CSEh H9 sur une couche de matrice de membrane basale à facteur de croissance réduit (voir le Tableau des matériaux, ci-après simplement appelée matrice) selon les instructions du fabricant.
    1. Pour enrober une assiette à 6 puits ou un plat de 10 cm, combinez 100 μL de matrice avec 5,9 ml de milieu Eagle modifié Dulbecco/F12 glacé. Enveloppez les plaques dans un film de paraffine et conservez-les toute la nuit à 4 °C. Utilisez-les le lendemain pour le passage des cellules après l’aspiration de l’excès de matrice/média.
  2. Cultivez les cellules d....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Supplément B27Gibco, Waltham, MA, États-UnisRéférence 17504-044
bFGFLife Technologies, Carlsbad, Californie, États-UnisPHG0263
BsaSigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisN° A9647
DispaseSTEMCELL Technologies, Vancouver, CanadaRéférence 7913
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, États-UnisRéférence 11330-032
LeGibco, Waltham, MA, États-Unis10010023
Matrigel à facteur de croissance réduit (matrice)Corning, Corning, État de New York, États-Unis356231
H9 CSEhWiCell, Madison, WI, États-UnisWA09
héparineSigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisRéférence 9041-08-01
L-glutamineGibco, Waltham, MA, États-UnisRéférence 25030-081
MonothioglycérolSigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisRéférence M6145
Médias mTESRSTEMCELL Technologies, Vancouver, CanadaRéférence 85850
N2 NeuroPlexGemini Bio Products, West Sacramento, CA, États-Unis400 à 163
NEAAGibco, Waltham, MA, États-UnisRéférence 11140-050
Triton X-100Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisT8787-100ML
Flacons T75 à fixation ultra-basseCorning, Corning, État de New York, États-UnisRéférence 3814

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