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Article de méthode
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8 juillet 2025
Source : Hakim, M. A., et al., Isolement et analyse fonctionnelle de l’endothélium artériolaire du parenchyme cérébral de souris. J. Vis. Exp. (2022)
Cette vidéo montre une méthode pour isoler les tubes endothéliales du parenchyme cérébral de souris. Grâce à une combinaison de digestion enzymatique et de dissociation mécanique, le processus produit un tube intact avec des cellules endothéliales.
Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.
1. Solutions et médicaments
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Figure 1 : Dissection et isolement d’artérioles parenchymateuses. (A) Cerveau de souris isolé avec cercle de Willis intact. (B) Un morceau rectangulaire de tissu cérébral disséqué contenant le MCA (flèche blanche). (C) Isolement de la pia de la partie supérieure du tissu (artériole, flèche bleue). (D) Artérioles (délimitées par des pointes de flèches bleues) reliées aux artères cérébrales moye.......
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Refroidisseur de bain (Isotemp 500LCU) | ThermoFisher Scientific | 13874647 | |
| Capillaires en verre borosilicaté (Pinning) | Warner Instruments | G150T-6 | |
| Capillaires en verre borosilicaté (électrodes pointues) | Warner Instruments | GC100F-10 | |
| Capillaires en verre borosilicaté (Trituration) | World Precision Instruments (WPI), Sarasota, Floride, États-Unis | Référence 1B100-4 | |
| BSA : Albumine sérique bovine | sigma | A7906 | |
| CaCl2 : chlorure de calcium | sigma | 223506 | |
| Collagénase (mélange de type H) | sigma | Réf. C8051 | |
| Numériseur d’acquisition de données | Molecular Devices, Sunnyvale, CA, États-Unis | Digidata 1550A | |
| Plat de dissection (Petri en verre avec fond en Sylgard anthracite) | Instrumentation des systèmes vivants, St. Albans City, VT, États-Unis | DD-90-S-BLK | |
| Dithioérythritol | sigma | D8255 | |
| DMSO : Sulfoxyde de diméthyle | sigma | D8418 | |
| Élastase (pancréas porcin) | sigma | E7885 | |
| Vanne de régulation de débit | Warner Instruments | FR-50 | |
| Interface du système de fluorescence, lampe ARC et alimentation, hypercommutateur et PMT | Molecular Devices, Sunnyvale, CA, États-Unis | Systèmes IonOptix | |
| Pinces (à pointe fine, aiguisées) | Le | Dumont #5 et Dumont #55 | |
| glucose | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, États-Unis) | Réf. G7021 | |
| HEPES : (acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazinethanesulfonique) | sigma | N° H4034 | |
| KCl : Chlorure de potassium | sigma | P9541 | |
| MgCl2 : chlorure de magnésium | sigma | M2670 | |
| Micromanipulateur | Siskiyou | MX10 | |
| Extracteur de micropipettes (numérique) | Sutter Instruments, Novato, Californie, États-Unis | P-97 ou P-1000 | |
| Microscope (Nikon-inversé) | Nikon Instruments Inc., Melville, NY, États-Unis | Ts2 | |
| Microscope (Nikon-inversé) | Nikon Instruments Inc | Eclipse TS100 | |
| Platine de microscope (aluminium) | Siskiyou, Grants Pass, OR, États-Unis | 8090P | |
| Contrôleur de pompe à microseringue | World Precision Instruments (WPI), Sarasota, Floride, États-Unis | SYS-MICRO4 | |
| NaCl : chlorure de sodium | sigma | Réf. S7653 | |
| Papaïne | sigma | Réf. P4762 | |
| Objectifs à contraste de phase | Nikon Instruments Inc | (Ph1 DL ; 10X et 20X) | |
| Ciseaux (lames de 3 mm et 7 mm) | Fine Science Tools (ou FST), Foster City, CA, États-Unis | Moria MC52 et 15000-00 | |
| Ciseaux (style Vannas ; lames de 9,5 mm et 3 mm) | Instruments de précision mondiaux | 555640S, 14364 | |
| Régulateur de température (double canal) | Warner Instruments | TC-344B ou C | |
| Système de contrôle de soupape | Warner Instruments | VC-6 |
