Génération d’une tranche de cerveau coronaire exposant les régions de l’amygdale à partir d’un cerveau de souris

Abstract

Source : Bosch, D., et al. Dissection optogénétique ex vivo des circuits de peur dans des tranches de cerveau. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo montre la préparation de fines tranches de cerveau coronal à partir d’un cerveau murin, exposant les régions amygdales riches en connexions synaptiques du cortex préfrontal médian. Les tranches sont ensuite récupérées dans du liquide céphalo-rachidien artificiel oxygéné pour maintenir la viabilité neuronale.

Protocol

1. Préparation des tranches aiguës

1. Préparez l’ACSF, la solution de coupe, les outils (ciseaux, scalpel, pince, spatule, pipette Pasteur) et les blocs de gélose
   REMARQUE : 1 L de liquide céphalo-rachidien artificiel (ACSF) est nécessaire par expérience. Comme publié précédemment, l’ACSF est préparé en dissolvant des produits chimiques dans du H2O doublement distillé. La solution de coupe est préparée en complétant 200 ml d’ACSF avec 0,87 ml de solution mère de 2 M MgSO₄.
2. Oxygéner l’ACSF et la solution de coupe tout au long de l’expérience avec 95 % d’O₂ et 5 % de CO₂.
3. Anesthésier profondément la souris à l’aide d’un appareil d’anesthésie pour petits animaux, à l’aide d’isoflurane (3 % d’oxygène). Vérifiez la profondeur de l’anesthésie à l’aide du réflexe de retrait du membre avant de continuer.
4. Décapitez la souris à l’aide de gros ciseaux et refroidissez immédiatement la tête dans une solution de coupe glacée.
5. Ouvrez le crâne par une seule incision médiane de la caudale au rostral et poussez doucement des morceaux du crâne sur les côtés à l’aide d’une pince. Retirez rapidement le cerveau en le soulevant doucement du crâne à l’aide d’une petite spatule arrondie. Coupez le cervelet avec un scalpel. Placez le cerveau dans une solution de coupe glacée.
6. Pour les sites d’injection de mPFC, utilisez un scalpel pour couper la partie antérieure du cerveau (contenant le mPFC) et mettez-la dans une solution de coupe glacée jusqu’à ce qu’elle soit tranchée.
7. Retirez l’excès de solution de coupe avec du papier filtre et collez la partie postérieure du cerveau sur la platine du vibratome.
8. Pour les coupes d’amygdale coronale, les sites d’injection MGm/PIN et les sites d’injection mPFC, collez le cerveau directement sur la scène (Figure 1D, à gauche et à droite). Placez un bloc de gélose supplémentaire derrière le cerveau pour plus de stabilité pendant le tranchage.
9. Placez l’étage dans une chambre de coupe avec une solution de coupe oxygénée glacée maintenue à 4 °C à l’aide d’une unité de refroidissement. À l’aide d’une lame en saphir, préparez des tranches coronales de l’amygdale. Placez les tranches dans une chambre d’interface alimentée en ACSF oxygéné à RT.

Results

Graphique 1. Injections stéréotaxiques, préparation de coupes cérébrales aiguës et visualisation des fibres présynaptiques. (A, B) Injection stéréotaxique de virus. A) Photo d’une souris anesthésiée placée dans un cadre stéréotaxique avec le crâne exposé et la pipette d’injection. Encadré : Zoomez sur l’image de la pipette d’injection remplie d’une solution virale mélangée à d...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Liquide céphalo-rachidien artificiel (ACSF)	Pour la composition, voir les références #16 et #23
Solutions de correctifs internes	Pour la composition, voir les références #16 et #23
Trancheuse, Microm HM650V	Fisher Scientific, Allemagne	Référence 920120
Unité de refroidissement pour trancheuse de tissus, CU65	Fisher Scientific, Allemagne	Référence 770180
Lame saphir	Couteaux Delaware Diamond
Stéréoscope, SZX2-RFA16	Olympus, Japon