Isolement des cellules immunitaires des plexus choroïdes de souris

Résumé

Source : Dominguez-Belloso, et al. Isolement et caractérisation des cellules immunitaires à partir de plexus choroïdes de souris micro-disséqués. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo montre la procédure d’isolement des cellules immunitaires des plexus choroïdes de souris. Cette procédure est utilisée dans la recherche en neuroimmunologie pour comprendre comment les cellules immunitaires du plexus choroïde affectent la santé du cerveau et diverses maladies neurologiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation des matériaux

1. Tampon de tri cellulaire activé par magnétisme (MACS) : Préparez 2 mM d’acide éthylènediamine tétraacétique (EDTA) et 0,5 % d’albumine sérique bovine (BSA) (Table des matériaux) dans du PBS-/-.
2. Solution mère de collagénase IV (20 U/μL) : Remettre la poudre en suspension dans du PBS+/+ (Table des matériaux), aliquote, et conserver à -20 °C.
   note: L....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
anti-souris CD16/CD32	BD Biosciences	553142	Anticorps de cytométrie en flux
Albumine bovine	MP Biomédical	160069	Réactif de blocage
Anti-souris APC CX3CR1	BioLégende	149008	Anticorps de cytométrie en flux
APC anti-souris TCRb	BioLégende	109212	Anticorps de cytométrie en flux
APC-Cy7 anti-souris CD4	BioLégende	100414	Anticorps de cytométrie en flux
APC-Cy7 anti-souris IA-IE	BioLégende	107628	Anticorps de cytométrie en flux
BD FACSymphony A5 Analyseur de cellules	BD Biosciences		Analyseur de cytométrie en flux
BV711 anti-souris Ly6C	BioLégende	128037	Anticorps de cytométrie en flux
Collagénase IV	Gibco	Référence 17104-019	Enzyme pour dissocier le tissu CP
DAPI	Thermo Scientific	Référence 62248	Marqueur vivant/mort
Edta			Chélateur d’ions
ciseaux fins	Le	Référence 14058-11	Outil de dissection
FITC anti-souris CD45	BioLégende	103108	Anticorps de cytométrie en flux
Régulateur de débit insert de perfusion	CareFusion	RG-3-C	Insert de perfusion sanguine
Logiciel FlowJo	BD Biosciences		Logiciel d’analyse
forceps	Le	Référence 11018-12	Outil de dissection
héparine	Sigma-Aldrich	H3149-10KU	anticoagulant
Imalgene	Boehringer Ingelheim		Kétamine, anesthésique
Perles électroniques OneComp	Invitrogen	Tél. : 01-1111-42	Contrôler les billes pour réaliser une compensation
Pbs-/-	Gibco	Référence 14190-094	tampon
PBS+/+	Gibco	Référence 14040-091	tampon
PE anti-souris CD8a	BioLégende	100708	Anticorps de cytométrie en flux
PE anti-souris F4/80	BioLégende	Référence 123110	Anticorps de cytométrie en flux
PE-Dazzle 594 anti-souris CD11b	BioLégende	101256	Anticorps de cytométrie en flux
Rompun	Bayer		Xylazine, anesthésique
Pinces fines	Biologie du Dumoxel	Référence 11242-40	Outil de dissection
Vétérinaire	Ceva		Buprénorphine, analgésique