Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation de la tranche de cerveau
- Utilisez des souris mâles C57BL/6J âgées de 4 à 8 semaines. Hébergez les animaux dans une pièce climatisée (21-23 °C ; 50 % d’humidité ; cycle lumière/obscurité 12 heures/12 heures, lumières allumées à 8h00) avec accès libre à la nourriture et à l’eau.
- Prenez une aliquote de 250 ml de liquide céphalo-rachidien artificiel (LCRa) et placez-la dans un bécher contenant de la glace. Dans le même temps, fournir un gaz continu composé de 95 % d’O2 et de 5 % de CO2.
- chirurgie
- Anesthésier l’animal avec de l’isoflurane à 4 % dans une boîte en verre pendant environ 3 min. Une fois que l’animal atteint une profondeur chirurgicale d’anesthésie (indiquée par l’absence de réponse au pincement des orteils), placez-le sur un plateau peu profond rempli de glace pilée et retirez la tête à l’aide de ciseaux.
- Exposez le crâne et coupez le muscle restant. Ensuite, à l’aide de rongeurs, décollez la surface dorsale du crâne du cerveau. Coupez les côtés du crâne à l’aide de rongeurs. Stérilisez tous les instruments chirurgicaux avec une solution d’éthanol à 75 %.
- À l’aide d’une spatule, coupez les bulbes olfactifs et les connexions nerveuses le long de la surface ventrale du cerveau et retirez le cerveau. Après la décapitation, transférez rapidement le cerveau dans un bécher rempli d’aLCR oxygéné glacé.
- Préparation de la tranche de cerveau du thalamus médial (MT)-cortex cingulaire antérieur (ACC)
note: Préparez des tranches qui contiennent le chemin de la MT à l’ACC.
- Coupez à la main le bloc cérébral avec deux coupes sagittales de 2,0 mm latéralement à la ligne médiane dans chaque hémisphère pour afficher l’anatomie sous-corticale. Faites ensuite deux coupes en angle. Faites la première coupe transversale parallèle au faisceau de fibres visibles dans le striatum.
- Faites la deuxième coupe transversale de la connexion entre le cervelet et le cortex visuel jusqu’au point médian entre la commissure antérieure et le tractus optique qui sont ventrals et parallèles à la voie thalamo-ingulaire.
- Fixez le bloc cérébral à une plaque angulaire (~120°) avec un adhésif cyanoacrylate et faites une coupe juste au-dessus du point de retournement de la voie. Dépliez la plaque, aplatissez-la et collez-la sur la platine de chambre d’un vibratome.
- Faites des coupes de cerveau thalamus-ACC médial (500 μm d’épaisseur), puis immergez-les dans un aCSF oxygéné glacé. Transférez les tranches dans la chambre d’enregistrement et maintenez-les à 32 °C sous perfusion continue (12 ml/min) avec de l’aCSF oxygéné pendant 1 h.
