Article de méthode

Différenciation de cellules souches pluripotentes induites en cellules progénitrices neurales

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Phillips, A. W., et al. Développement de corps embryoïdes libres sériques dérivés de HiPSC pour l’interrogation de cultures de cellules souches 3D à l’aide de tests physiologiquement pertinents. J. Vis. Exp. (2017).

La vidéo présente une technique de différenciation des cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSC) en cellules progénitrices neurales (NPC). Initialement, les hiPSC sont cultivées sur une couche nourricière de fibroblastes embryonnaires de souris (MEF). Par la suite, les cellules sont détachées et transférées sur une plaque recouverte de biopolymère pour permettre aux MEF d’adhérer et de se séparer des hiPSC. Les hiPSC en suspension sont ensuite transférés sur une plaque à fond en V et centrifugés pour former des agrégats. Enfin, l’ajout d’un milieu de différenciation induit la différenciation des hiPSC au sein de l’agrégat en NPC.

Protocole

1. Génération de cellules progénitrices neurales

  1. Maintenir les hiPSC dérivées de fibroblastes et de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) dans des plaques à 6 puits sur une couche de cellules embryonnaires de souris (MEF) irradiée à γ dans un milieu iPSC humain complétée par de petites molécules.
    REMARQUE :
    L’entretien quotidien est une version modifiée des procédures précédemment signalées.
    1. Déposer 6 x 105 MEF sur chaque puits d'une plaque de culture tissulaire à 6 puits dans un milieu recommandé de 300 μL/puits (selon le protocole du fabricant).
    2. Après 48 h, remplacer ....

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Résultats

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Figure 1 : Schéma décrivant les premières étapes de la préparation des SFEB. Une fois que les iPSC ont été récoltées à l’aide d’une dissociation enzymatique, elles sont plaquées dans des plaques à 96 puits et centrifugées à 163 x g pendant 3 minutes pour induire une agrégation rapide. Après 14 jours in vitro (DIV), les agrégats cellulaires peuvent être transférés à partir de plaques de 96 puit.......

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
SFEB Neuronal Differentiation Milieux de culture cellulaire. Réactifs. Composants
Milieu d’induction neuronale STEMdiff (hiPSC Media)Technologies STEMCELLTél. 0-5835250ml
PluriQ ES-DMEM Medium (MEF Media)GlobalStemGSM-2001
Composants multimédias DM1
D-MEM/F-12 (1X), Glutamax liquide, 1:1Invitrogen10565018385 ml
Remplacement du sérum knockoutInvitrogen1082802820 % 100ml
Stylo/StreptocoqueInvitrogen151401225ml
Glutamax 200mMInvitrogen350500615ml
Solution d’acides aminés non essentiels MEM 10 mM (100X), liquideInvitrogen111400505ml
2-Mercaptoéthanol (1 000X), liquideInvitrogen21985023900ul
Petites molécules
Y27632 (ROCKi)TigeRéférence 04-0012-1010 uM
Composants/Matériaux
Fibroblastes embryonnaires de sourisGlobalStemGSC-6301G
Fond en V de 96 puits avec couverclesà feuilles persistantesRéférence 222-8031-01V
StemPro Accutase réactif de dissociation cellulaireThermoFisherA1110501
6 puits fond platFaucon353046

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Mots-clés

Fibroblastes embryonnaires de sourisculture sur couche nourrici replaque rev tue de biopolym replaque en Vformation d agr gats cellulairesmilieu de diff renciationinhibiteur de ROCKplaque faible adh rence

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