$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation des animaux et anesthésie
- Induire une anesthésie chez la souris par inhalation d’isoflurane/oxygène. Utilisez 4 % d’isoflurane pour l’induction de l’anesthésie et 2-3 % pour le maintien à un débit d’oxygène de 2,5 L/min. Ajustez le pourcentage d’isoflurane pour le maintien de l’anesthésie en fonction de l’état de la souris, c’est-à-dire que les souris petites et faibles nécessitent moins d’anesthésiques. Confirmez une anesthésie adéquate, par exemple en appliquant une légère pression sur le coussin de marche des membres postérieurs pour vérifier l’absence de réflexe de retrait de la douleur.
- Contrôlez la température corporelle de la souris à l’aide d’une plaque chauffante thermostatique à 37 °C pour éviter la diminution de la température corporelle pendant l’anesthésie.
- Ajustez la souris avec le cône nasal pour le maintien de l’anesthésie. Assurez-vous que l’animal reçoit suffisamment d’oxygène en vérifiant que le cône nasal n’obstrue pas les voies respiratoires et que l’animal respire régulièrement.
- Pendant l’enregistrement, surveiller si la souris est suffisamment anesthésiée en observant la fréquence respiratoire (environ 1 Hz en anesthésie) et l’absence de réflexe de retrait sur une légère pression. Augmentez manuellement la concentration d’isoflurane si l’anesthésie n’est pas assez profonde.
- Après les mesures, laissez la souris récupérer sur la plaque chauffante ou dans la chaleur d’une lampe infrarouge jusqu’à ce qu’elle ait retrouvé une conscience suffisante pour maintenir la décubitus sternal, pendant environ 2 à 5 min. Ne laissez pas la souris sans surveillance et en compagnie d’autres souris jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie de l’anesthésie.
2. Mesure du CMAP dans les membres antérieurs
- Utilisez les électrodes à aiguille 27 G pour les mesures CMAP des membres antérieurs. Voir la figure 1 pour les emplacements recommandés pour le positionnement des électrodes.
- Placez les électrodes sur les membres antérieurs comme suit.
- Placez la souris sur le coussin chauffant en position couchée et utilisez du ruban adhésif pour étendre les deux membres antérieurs sur les côtés du corps (Figure 1B).
- Placez les électrodes de stimulation (1 = anode et 2 = cathode) par voie sous-cutanée des deux côtés du membre antérieur pour les aligner avec le nerf du plexus brachial. Soulevez la peau pour insérer l’aiguille perpendiculairement à travers la peau et enfoncez environ 5 mm de l’aiguille sous la peau sans perforer les muscles sous-jacents.
- Placez l’électrode d’enregistrement (3) par voie sous-cutanée sur le muscle biceps brachial en soulevant la peau. Placez l’électrode de référence (4) sur les coussinets de marche à 3 mm de profondeur et à un angle de 30 degrés. Placez l’électrode de masse (5) par voie sous-cutanée sur le côté de la souris.
note: Les électrodes sont à proximité les unes des autres dans cette configuration. Empêchez les électrodes de se toucher car cela déforme l’enregistrement.
3. Acquisition de données
- Démarrez la stimulation en appuyant sur le bouton de stimulus récurrent de l’unité de contrôle et tournez le bouton du contrôleur d’intensité pour augmenter le stimulus. Stimulez tous les axones à l’aide de 1 impulsion/s avec une durée de stimulus de 0,1 ms. Sélectionnez la fréquence et la durée correctes dans les menus déroulants du logiciel.
- Pour atteindre des stimuli supramaximaux (5-20 mA ; dans des conditions démyélinisantes jusqu’à 60 mA), appliquez des stimuli croissants en tournant le bouton du contrôleur d’intensité jusqu’à ce que l’amplitude de la réponse CMAP cesse d’augmenter. À partir de là, augmentez encore le stimulus de 20 % pour vous assurer que l’amplitude du CMAP a atteint sa réponse maximale. Mettez fin à la stimulation en appuyant à nouveau sur le bouton de stimulus récurrent.
- À l’aide de l’outil de marqueur, indiquez les points suivants de l’enregistrement : déclenchement du stimulus, initiation de la réponse, pic positif maximal et pic négatif maximal (Figure 2).
- Déterminez la latence (en ms) comme un délai entre le déclenchement du stimulus et le début de la réponse (Figure 2). Définissez le déclenchement de la réponse comme le premier point où l’amplitude commence à augmenter. Utilisez la latence pour évaluer la démyélinisation des axones.
- Mesurez l’amplitude (mV) entre le pic négatif maximal et le pic positif maximal (Figure 2). Utilisez l’amplitude de l’amplitude pour corréler le nombre d’axones fonctionnels.
